关键词:
金银花
忍冬藤
忍冬叶
含量测定
指纹图谱
化学模式识别
质量控制
摘要:
忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.是我国传统药用植物,忍冬全株是宝皆可入药,具有清热、解毒、抗菌、消炎等多种功效。宋代以前入药部位的选取多以茎、叶为主,发展至明代逐渐演变为茎、叶、花入药,《本草纲目》记载:“忍冬,茎叶同花,功用皆同”。2015年版《中国药典》收录了金银花、忍冬藤两个品种,忍冬叶并未被收录,通常被认为是忍冬的非药用部位没有得到充分利用,造成资源浪费。目前,忍冬的研究多集中在花和藤,叶的研究相对较少,而三者之间化学成分对比研究也未见报道。2015年版《中国药典》金银花和忍冬藤含量测定项下指标成分较少,因此质量控制有待进一步完善和提高。本研究采用超高效液相色谱法(UPLC)测定金银花、忍冬藤和忍冬叶中11种化学成分含量,并采用波长切换法分别建立了三者的指纹图谱;采用聚类分析、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)对含量测定结果和指纹图谱进行分析,为全面控制忍冬不同部位的质量提供方法与依据,为忍冬的综合开发利用提供数据支撑。目的:建立同时测定金银花、忍冬藤和忍冬叶中11种化学成分含量的UPLC方法并测定其含量;同时建立金银花、忍冬藤和忍冬叶三者UPLC指纹图谱;采用聚类分析和PCA分析等化学模式识别方法系统比较金银花、忍冬藤、忍冬叶在有机酸类、黄酮类和环烯醚萜苷类含量和化学成分组成上的差异,为忍冬叶的开发利用,金银花、忍冬藤、忍冬叶的质量控制提供参考。方法:1含量测定研究:采用UPLC法同时测定金银花、忍冬叶和忍冬藤中11种化学成分含量,以ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100 mm,1.7μm)为色谱柱;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量0.3 mL·min-1;柱温30℃;样品室温度8℃;检测波长:新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、洋蓟素、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C为326 nm,芦丁和木犀草苷为352 nm,马钱苷为238 nm;进样量1.0μL。采用聚类分析和PCA分析等化学模式识别方法对金银花、忍冬藤和忍冬叶中11种化学成分含量进行比较。2指纹图谱研究:采用UPLC法对金银花、忍冬藤和忍冬叶的指纹图谱进行测定,以ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100 mm,1.7μm)为色谱柱;流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量0.3 mL·min-1;柱温30℃;样品室温度8℃;检测波长326 nm(0~8 min、16~21 min,检测有机酸类)、238 nm(8~14 min,检测环烯醚萜苷类)、350 nm(14~16min,检测黄酮类);进样量1.0μL。采用聚类分析和PCA分析等化学模式识别方法对金银花、忍冬藤和忍冬叶指纹图谱进行比较。结果:1含量测定结果:11种化学成分分离良好,各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系(r≥0.9996),精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合含量测定的要求。聚类分析和PCA分析结果显示28批样品主要分为2类,其中Ⅰ类为忍冬藤,Ⅱ类为金银花与忍冬叶,表明忍冬藤中所含11种化学成分的含量与金银花和忍冬叶有所区别,金银花和忍冬叶中11种化学成分的含量大体相近。OPLS-DA分析结果显示木犀草苷为金银花和忍冬叶主要差异性化合物,综合含量测定结果,木犀草苷在忍冬叶中的含量明显高于金银花。2指纹图谱结果:对28批样品进行分析,共检出了23个色谱峰,标记为F1F23。其中10批金银花和9批忍冬叶共标定14个共有峰,指认8个色谱峰。5月份采收的4批忍冬藤共标定20个共有峰,秋冬采收的5批忍冬藤共标定16个共有峰,均指认10个色谱峰。各批次金银花和忍冬叶的相似度均在0.948以上,9批忍冬藤相似度在0.629以上。聚类分析和PCA分析结果显示28批样品主要分为2类,其中Ⅰ类为忍冬藤,Ⅱ类为金银花与忍冬叶,表明忍冬藤与金银花、忍冬叶两者所含化学成分存在差异,金银花和忍冬叶化学成分特征大体相似。OPLS-DA分析结果显示色谱峰F18、F17(木犀草苷)、F21、F10对应的化合物为金银花和忍冬叶主要差异性成分,可作为区分两者的特征差异性指标。结论:本研究所建立的多成分含量测定方法以及指纹图谱方法准确、稳定、重复性好,可为金银花、忍冬藤、忍冬叶的质量控制提供参考。结合化学模式识别法对金银花、忍冬藤、忍冬叶进行比较与区分,金银花和忍冬叶在有机酸类、黄酮类和环烯醚萜苷类化学成分组成上相似,忍冬叶具有较强开发价值;色谱峰F18、F17(木犀草苷)、F21、F10对应的化合物为金银花和忍冬叶主要差异性成分。