关键词:
石膏样小孢子菌
Dectin-1
TLR-2
TLR-4
细胞因子
摘要:
目的:本试验旨在研究石膏样小孢子菌经皮肤和静脉感染小鼠后皮肤和肺脏组织中模式识别受体Dectin-1,TLR-2和TLR-4受体和细胞因子动态变化规律。方法:通过对C57BL/6小鼠皮下接种石膏样小孢子菌,分别在第3 d,7 d和14 d取病变皮肤组织病理学观察孢子定植部位和病理损伤;分别在第3 h,6 h和12 h取病变皮肤组织用荧光定量PCR检测受体mRNA的转录表达量;分别在第1 d,3 d,7 d和14 d取样,用荧光定量PCR检测细胞因子mRNA的转录表达量。通过对KM小鼠静脉注射石膏样小孢子菌,连续7 d记录小鼠体重的变化并连续30 d记录小鼠存活率。在第2 d,5 d和9 d取心脏,肝脏,脾脏,肺脏和肾脏通过组织载菌量,脏器指数和组织病理学评估组织病理损伤。在第2 d,5 d,9 d和14 d取小鼠肺脏组织通过qRT-PCR定量3种模式识别受体和14种细胞因子mRNA的转录表达水平,在第2 d,5 d和9 d取小鼠肺脏组织通过免疫荧光染色评估感染小鼠的肺脏免疫细胞的募集。结果:石膏样小孢子菌感染小鼠后导致皮下脓肿,大量的炎性细胞浸润,并伴有角质层增厚。试验中受体Dectin-1,TLR-2和TLR-4的转录表达量增加(p<0.01),细胞因子IL-6,IL-1β,IL-23,TGF-β,IL-17A,IL-17F和IL-22的转录表达量增加(p<0.01)。模式识别受体能识别石膏样小孢子菌表面模式识别分子从而激活Th17途径,分化成熟的Th17细胞分泌细胞因子IL-22,IL-17A和IL-17F。石膏样小孢子菌静脉注射感染小鼠后导致小鼠体重减轻(p<0.001),并且随着孢子浓度增加死亡率增加(p<0.01)。从组织载菌量,脏器指数,组织病理学等结果表明进入血液循环的石膏样小孢子菌主要定植于肺脏并导致肺脏严重受损。在试验期间,3种模式识别受体和14种细胞因子mRNA的转录表达水平在肺中显着增加(p<0.05)。均呈现达到高峰并逐渐下降,其中TLR-2,TLR-4,IL-6,IL-1β,IL-23,IL-10,IL-4,IL-17A,IL-17F,IL-22,TNF-α和IFN-γ的转录表达量在感染后第2 d达到最高峰,Dectin-1,IL-9和IL-13的转录表达量在感染后第5 d达到最高峰。TGF-β和IL-12的转录表达量在感染后第14 d达到最高峰。炎性细胞浸润主要包括巨噬细胞,树突状细胞和多形核中性粒细胞,主要浸润的部位在肺泡隔和支气管周围。结论:(1)当皮下注射石膏样小孢子菌后,模式识别受体能识别石膏样小孢子菌表面模式识别分子从而激活Th17途径,分化成熟的Th17细胞分秘细胞因子IL-22,IL-17A和IL-17F,从而发挥抗石膏样小孢子菌的作用;(2)当小鼠深度感染石膏样小孢子菌,肺脏模式识别受体能识别石膏样小孢子菌表面模式识别分子从而激活Th17途径,分化成熟的Th17细胞分泌细胞因子IL-22,IL-17A和IL-17F,促进中性粒细胞、巨噬细胞,树突状细胞的募集,从而发挥抗石膏样小孢子菌的作用。