关键词： 病毒   感染   猪圆环病毒3型   机制   反向遗传   病毒拯救  

摘要： 猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)是与猪皮炎和肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)、生殖衰竭和多系统炎症等临床症状相关的病原体,对养猪业构成严重威胁。然而,一直以来,因PCV3分离较为困难等原因,其发病和致病机制目前仍不清楚。近年来,一些研究者成功地利用反向遗传操作系统拯救出PCV3,并初步揭示了其生物学特性。尽管如此,PCV3的致病机制仍未被完全阐明。本文综述了反向遗传技术在PCV3研究中的应用和进展,旨在为深入研究PCV3的致病机制、防控和疫苗研发等提供研究参考和新的思路。

关键词： 禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)   干扰素   体外水平   体内水平   抑制作用  

摘要： 为明确禽源α干扰素(IFN-α)对禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)体内外增殖的抑制效果,本试验在细胞和动物水平上分别采用鸡胚成纤维(DF-1)细胞和海兰褐鸡作为模型,于REV接种前(预防)和接种后(治疗)分别添加不同浓度的禽IFN-α处理,分析禽IFN-α在体外和体内对REV增殖的影响。体外试验结果显示,与阳性对照组相比,禽IFN-α浓度为33 IU/mL的治疗组72 h细胞和上清中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05),禽IFN-α浓度为33 IU/mL的预防组72 h细胞中REV的增殖受到了显著抑制(P<0.05)。通过比较各组海兰褐鸡的平均体重、血液中REV阳性率和病毒载量、泄殖腔REV阳性率和排毒量、免疫器官指数和病毒载量系统评估禽IFN-α对REV体内增殖的影响,结果显示,与阳性对照组相比,禽IFN-α浓度为1 500 IU的治疗组海兰褐鸡21和28日龄时体重显著升高(P<0.05),14日龄时肝脏发育指数以及14和28日龄时的脾脏发育指数显著降低(P<0.05),14日龄时血液和脾脏中病毒载量显著降低(P<0.05),7和21日龄时泄殖腔排毒量显著降低(P<0.05)。本试验在体外细胞和体内动物2个层面均证实了禽IFN-α对REV增殖具有显著的抑制效果,这不仅为禽网状内皮组织增殖病的防控策略提供了新的思路和辅助手段,也为未来抗病毒药物的研发和应用提供了科学依据。

关键词： 登革热   流行病学特征   自回归移动平均模型  

摘要： 目的通过分析云南省登革热的流行特征,探索云南省在新型冠状病毒感染(以下简称新冠)疫情期间采取的防控措施是否对登革热的流行情况产生影响,为制定更具针对性的防控策略提供科学依据。方法对云南省2013—2023年登革热流行特征进行分析;选取2013—2019年登革热病例数据建立自回归移动平均模型,预测2020—2022年登革热发病数,将预测值和真实值进行比较。结果2013—2023年云南省共报告登革热病例28131例,其中本地病例24209例,境外输入病例3922例,年均报告发病率为5.35/10万。每年仅有1个发病高峰,主要分布在7—11月。云南省各州市均有登革热病例报告,其中年均发病率最高的4个州市分别为西双版纳州(117.34/10万)、德宏州(56.93/10万)、临沧市(8.44/10万)、普洱市(3.12/10万)。男女比例为1.19∶1,发病年龄主要集中于20~50岁;病例职业主要为农民、商业服务、家务及待业。通过SPSS软件拟合2013—2019年的登革热病例数据建立ARIMA(0,0,1)(1,2,0)_(12)模型,模型拟合效果好。使用模型对2020—2022年云南省各月份登革热发病人数进行预测,只有少部分真实值处于预测值的95%置信区间内。结论新冠疫情的各项防控措施有效降低了登革热的报告发病数,随着新冠疫情防控政策的持续优化和调整,需对登革热的防控工作提出新的要求,实施更为精准的防控策略。

关键词： 禽流感病毒   RAA   CRISPR/Cas13a  

摘要： 对NCBI文库公布的120条不同亚型禽流感病毒的M基因序列进行分析,筛选得到一处高保守片段并进行重组酶介导等温核酸扩增(recombinase-aided amplification,RAA)引物和crRNA的设计。待测样品先进行RAA核酸扩增,再将扩增产物转移至有规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas13a检测体系中,通过监测该体系中荧光值的变化情况进行结果判定。使用梯度稀释(10^(6)~10^(0)拷贝/μL)的标准阳性质粒以及其他7种禽病病毒验证方法的灵敏度和特异性,并利用本试验所建方法和国标荧光RT-PCR方法对50份临床样品(21份阳性样品、29份阴性样品)进行检测以评价方法的检测性能。结果显示,本试验建立的检测方法灵敏度为10^(2)拷贝/μL,较普通RAA方法灵敏度提高了2个数量级;能特异性检出AIV,不与NDV、IBV、ILTV、IBDV、ALV、AMPV、AAV-1发生交叉反应;与国标荧光RT-PCR方法相比,该方法检测的特异性、准确性和一致性分别为100%、95.24%和98.00%。结果表明,本试验建立了检测AIV通用型的RAA-CRISPR/Cas13a快速诊断技术,其在37℃条件下60 min内即可完成检测,具有快速、灵敏、特异等优势,为AIV的现场快速检测提供了手段。

关键词： 组蛋白去乙酰化酶抑制剂   MGCD0103   抑制   小反刍兽疫病毒   病毒复制  

摘要： 旨在探究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)选择性抑制剂MGCD0103(Mocetinostat)对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)在山羊子宫内膜上皮细胞(EEC细胞)复制的影响。本研究通过RT-qPCR法测定PPRV感染后宿主细胞HDACs和抑制剂处理细胞中PPRV N基因的转录水平,通过Time of Addition Assay确定MGCD0103在PPRV复制过程的作用阶段,用Western blot检测PPRV N蛋白的相对表达量,并采用TCID50方法测定了病毒滴度。结果表明,PPRV感染引起EEC细胞HDAC1(P<0.001)和HDAC2(P<0.002)转录水平明显上升;MGCD0103在病毒入侵和复制阶段均发挥了抑制作用,且在复制阶段抑制作用更明显;MGCD0103显著降低PPRV N基因转录水平和表达水平及病毒滴度(P<0.002),且其抑制PPRV在EEC中的半数有效浓度(EC50)和药物选择指数(SI)分别是0.43μmol·L^(-1)和4.35。本研究确定MGCD0103显著抑制PPRV的复制,这对研发有效抗PPRV药物具有重要意义,为高效率产毒细胞株的构建提供新思路。

关键词： 化学发光法   酶联免疫吸附法   血液标本   乙肝病毒   检测  

摘要： 对比分析化学发光法、酶联免疫吸附法用于检测血液样本内乙肝病毒的价值。方法 选择2022年1月-2023年12月我中心接收疑似乙肝血液样本50例进行回顾性分析,均采取化学发光法、酶联免疫吸附试验对样本内乙肝病毒进行检测,以实时荧光定量聚合酶链反应结果为金标准,分别计算化学发光法、酶联免疫吸附试验检测的灵敏度、特异度及准确率,进一步分析两种检测方法在检测乙肝五项的阳性检出率。结果 50例疑似乙肝患者经实时荧光定量聚合酶链反应检查,结果 显示35例确诊为乙肝疾病,占比70.00%,经过计算,化学发光法检测的灵敏度为97.14%、特异度为93.33%、准确率为96.00%,与酶联免疫吸附试验计算结果比较无统计学差异(p>0.05)。进一步检测乙肝五项结果显示,两项技术在检测HBsAb(乙肝表面抗体)、HBcAb(乙肝核心抗体)、HBsAg(乙肝表面抗原)阳性率比较无统计学差异(p>0.05),化学发光发检测HBeAg(乙肝e抗原)、HBeAb(乙肝e抗体)阳性率高于酶联免疫吸附试验(p<0.05)。结论 化学发光法与酶联免疫吸附试验均可作为检测血液样本内乙肝病毒的方法,其中以化学发光法检测结果更为准确,可用于临床动态监测病情,值得借鉴。

关键词： 流感   儿童   流感疫苗   抗病毒药物  

摘要： 流行性感冒(流感)是我国儿童最常见的急性呼吸道传染病。每年季节性流感暴发严重危害儿童健康,造成沉重的医疗和社会经济负担,引起公共卫生领域高度关注。近年来我国多种新型流感疫苗和抗流感病毒药物相继获批用于儿童,为儿童的流感预防和治疗提供了更多选择。为了积极推进我国儿童流感疫苗接种和抗病毒药物的规范应用,由中华医学会感染病学分会儿科感染学组、国家卫生健康委能力建设和继续教育儿科专委会感染组、中国临床实践指南联盟方法学专委会牵头组织儿科学、传染病学、流行病学、卫生政策及指南方法学专家组成指南制订小组,以实践为导向,提出8个实践中与儿童流感疫苗接种和抗流感病毒药物临床应用重点问题。经过研究问题构建、证据检索和综合、证据评价以及从证据形成推荐意见讨论,制定推荐意见和实施建议,旨在为各级医疗机构的儿科医师、从事疫苗接种服务的社区医务人员、从事传染病防控的机构专业人员提供指导。

关键词： 还原型谷胱甘肽   丁二磺酸腺苷蛋氨酸   病毒性肝炎   高胆红素血症   疗效  

摘要： 收集临床病毒性肝炎用药治疗及预后情况现状,分析原型谷胱甘肽结合丁二磺酸腺苷蛋氨酸治疗病毒性肝炎的临床效果及安全性。方法 收集2022年1月-2023年1月江苏省阜宁县人民医院接诊的处于病毒性肝炎活动期的高胆红素血症患者100例临床资料,常规进行抗病毒治疗,同时均关注患者日常饮食情况,指导化妆加强运动。另随机分为单一组(n=50,单一还原型谷胱甘肽治疗)与联合组(n=50例,联合二磺酸腺苷蛋氨酸)。均按医嘱用药1疗程(14d),对比用药前后肝功能、凝血酶原时间差异,同期对比治疗效果及预后不良情况。结果 联合组肝功能指标γ- 谷氨酰转移酶、总胆红素及丙氨酸氨基转移酶均低于单一组(P<0.05);联合组凝血酶原时间短于单一组,用药治疗总有效率高于单一组(P<0.05);两组用药后不良反应发生率差异无统计学意义,联合用药并无增加用药安全性风险(P>0.05)。结论 应用还原型谷胱甘肽与丁二磺酸腺苷蛋氨酸联合疗法,对于病毒性肝炎伴随的高胆红素血症患者,能够显著优化其肝脏功能,同时联合用药无用药安全性风险,治疗效果显著,临床用药推广价值高。

关键词： 新型冠状病毒感染   分消走泄法   寒湿疫   杨质秀  

摘要： 杨质秀教授认为新型冠状病毒感染归属中医“寒湿疫病”范畴,疫毒夹杂寒湿伤人致病,寒湿之邪性质黏滞、重浊,易阻遏气机,损伤阳气,病势缠绵不去。杨质秀教授临证时针对新型冠状病毒感染的病因病机、病证特点,依据治疗湿病的“分消走泄法”大法,提出宣消祛邪、消导化痰、温阳通利等法,临床疗效显著。

关键词： 水泡性口炎病毒   血管内皮屏障   黏附连接   低密度脂蛋白受体   Wnt/β-连环蛋白信号通路  

摘要： 目的:探讨水泡性口炎病毒(VSV)对血管内皮(VE)屏障的损伤作用,并阐明其作用机制。方法:采用犬肾细胞对VSV进行扩增,采用小鼠脑血管内皮瘤bEnd. 3细胞检测VSV的半数组织培养感染剂量(TCID_(50)),采用300倍TCID_(50)进行后续实验。将bEnd. 3细胞分为感染0 h组、感染4 h组、感染8 h组和感染12 h组,进行VSV感染损伤VE屏障实验;将bEnd. 3细胞分为对照组、感染组和纠正组,进行抑制VSV复制与VE屏障恢复实验。将bEnd. 3细胞接种于Transwell小室,构建体外VE屏障模型,采用细胞电压电阻仪检测感染VSV不同时间后各组bEnd. 3细胞中跨上皮电阻(TER),采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖渗漏实验检测各组渗透系数,采用免疫荧光染色法观察VSV感染后各组bEnd. 3细胞骨架及黏附连接(AJs)中VE-钙黏蛋白、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸化β-连环蛋白(p-β-catenin)定位变化,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中Wnt和β-catenin mRNA表达水平,采用Western blotting法检测各组细胞中Wnt、β-catenin和p-β-catenin表达水平。结果:VSV的TCID_(50)为10^(-4.5)·100μL^(-1)。Transwell小室实验检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中TER明显降低(P<0.05),渗透系数明显升高(P<0.05)。免疫荧光染色,与对照组比较,感染组bEnd. 3细胞骨架紊乱,细胞间隙增大,AJs线性指数明显降低(P<0.05),β-catenin和p-β-catenin从细胞膜转移至细胞核周围。RT-qPCR法检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中Wnt mRNA表达水平明显降低(P<0.05),β-catenin mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与感染0 h比较,其他各组细胞中Wnt蛋白表达水平明显降低(P<0.05),β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05),p-β-catenin表达水平明显升高(P<0.05)。在抑制VSV复制并纠正低密度脂蛋白受体(LDLR)异常后,Transwell小室实验检测,与感染组比较,纠正组bEnd. 3细胞中TER明显升高(P<0.05),渗透系数明显降低(P<0.05)。免疫荧光染色,与感染组比较,纠正组细胞间隙减小,细胞中β-catenin和p-β-catenin核周聚集现象有所改善。RT-qPCR法检测,与感染组比较,纠正组细胞中Wnt mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与感染组比较,纠正组细胞中Wnt蛋白表达水平明显升高(P<0.05),β-catenin表达水平差异无统计学意义(P>0.05),p-β-catenin表达水平明显降低(P<0.05)。结论:VSV感染后可引起LDLR失活,降低Wnt蛋白表达水平,造成β-catenin磷酸化水平升高并发生内化,破坏AJs稳定性,最终导致VE屏障损伤。