关键词： 虫媒病毒   生物信息分析   中国疾病预防控制中心   核酸序列测定   稳步推进   病毒病预防控制所  

摘要： 近年来,随着核酸序列测定技术、生物信息分析技术等的快速发展,中国新发现虫媒病毒种类逐步增多,相关虫媒病毒病的诊断、防治等研究在稳步推进。为全面反映中国虫媒病毒研究状态,由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所王环宇研究员牵头组织了虫媒病毒研究重点号。

关键词： 重组新型冠状病毒疫苗(腺病毒载体)   质量控制   生物学活性  

摘要： 目的建立通用、稳定的腺病毒载体重组新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome 2,SARS-CoV-2)疫苗的体外生物学活性检测方法,并对其进行方法学验证。方法利用实验室之前筛选出的ELISA试剂盒筛选不同的细胞、细胞浓度和感染剂量,从而建立通用体外生物学活性检测方法并进行相对准确度、中间精密度、线性和范围的验证。结果建立了通用体外生物学活性检测方法,筛选出HEK293细胞为适宜感染用细胞,其铺板细胞浓度为8×10^(5)个/mL,细胞感染剂量是1.0×10^(7) VP。该方法经不同人员和日期检测验证,每个效价水平的相对偏倚应均在±30%内,水平效价测定值的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)≤30%,疫苗效价理论值(对数)与其相应的效价测定值(对数)作图并进行线性回归计算,直线回归方程的相关系数r≥0.95,效价水平范围在50%~200%,证明能满足对多种SARS-CoV-2变异株腺病毒载体疫苗的检定需要。结论建立了通用、稳定的腺病毒载体SARS-CoV-2疫苗体外生物学活性检测方法,该方法可应用于腺病毒载体SARS-CoV-2疫苗的质量控制。

关键词： 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒-2   横纹肌溶解症   急性肾损伤  

摘要： 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒-2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染可导致以呼吸系统为主的多系统损伤^([1,2]),但SARS-CoV-2相关横纹肌溶解症(rhabdomyolysis, RML)的报道并不多,可能与轻中度横纹肌溶解缺乏典型临床症状,难以及时发现有关^([3])。

关键词： 摇床生物反应器   篮式生物反应器   NBS生物反应器   片状载体   球状载体   Vero细胞   柯萨奇病毒A10型  

摘要： 目的比较摇床生物反应器、篮式生物反应器和NBS生物反应器培养Vero细胞制备柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)的效果。方法分别采用2 L摇床生物反应器(预辐照片状载体袋)、15 L篮式生物反应器(片状载体)和40 L NBS生物反应器(Cytodex 1球状载体)培养Vero细胞,制备CV-A10,比较不同类型生物反应器细胞贴壁效率、营养代谢物质含量、细胞生长特性以及病毒滴度和抗原含量差异。将2 L摇床生物反应器放大至50 L培养Vero细胞和CV-A10,比较不同规模摇床生物反应器制备的病毒滴度和抗原含量。结果Vero细胞在片状载体上的贴壁效率远高于球状载体,不同类型生物反应器中葡萄糖和乳酸含量变化曲线保持一致;不同类型生物反应器均可用于Vero细胞的高密度培养,相比于使用球状载体培养的NBS生物反应器,使用片状载体培养的摇床和篮式生物反应器可获得更高的细胞密度;不同类型生物反应器均可用于CV-A10的高效制备,且制备的CV-A10抗原含量和病毒滴度无差异;50 L摇床生物反应器可成功放大培养Vero细胞和CV-A10,不同规模摇床生物反应器制备的病毒滴度和抗原含量无差异。结论摇床生物反应器、篮式生物反应器和NBS生物反应器均可用于Vero细胞的稳定培养和CV-A10的高效制备。

关键词： 呼吸道合胞病毒   流行病学   间接免疫荧光法  

摘要： 目的分析南昌市呼吸道合胞病毒(RSV)感染的流行病学特征,为临床防治提供参考依据。方法选取2022年1月至2024年6月因出现流感样症状在江西中医药大学附属医院就诊的7995例患者为研究对象,采用间接免疫荧光法检测患者血清中病原体免疫球蛋白M(IgM)抗体水平。通过χ^(2)检验对不同性别、年龄、季节、年份患者的RSV阳性率进行统计分析。结果7995例患者的呼吸道病原体总阳性率为34.55%(2762/7995),RSV的阳性率为2.34%(187/7995)。RSV以混合感染为主(93.58%,175/187),三重感染占比最高(51.43%,90/175),RSV+肺炎支原体(MP)+副流感病毒(PIV)+腺病毒(ADV)(24.00%,42/175)和RSV+MP+PIV(21.14%,37/175)的混合感染模式比较多见。RSV在不同性别间阳性率差异无统计学意义;0~6岁儿童组阳性率高于其他年龄组,不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(P<0.001);夏季患者阳性率高于其他季节,不同季节间阳性率差异有统计学意义(P<0.05);2023年至2024年患者阳性率高于2022年,差异有统计学意义(P<0.05)。结论南昌市RSV易合并其他病毒感染,感染分布具有年龄、季节特点,年份变化特征可能与新冠疫情防控放开有关。

关键词： 病毒宏基因组学   蜱   RNA病毒   贵州   印江  

摘要： 目的了解贵州省印江土家族苗族自治县(印江县)蜱携带病毒的潜在威胁。方法在印江县采集牛体表寄生蜱。通过蜱的形态学特征和16S rDNA基因扩增鉴定蜱的种类。病毒宏基因组测序由Illumina平台完成。获得的病毒序列通过质控和组装后与美国国立生物技术信息中心中登录的病毒序列进行比对分析,构建系统发育树,进一步了解其遗传进化特征。结果2023年7月共采集蜱23只,均为微小扇头蜱。病毒宏基因组测序表明,蜱携带的蜱媒病毒包括白纤病毒科、弹状病毒科和楚病毒科3个病毒科和一些未分类的病毒。本研究获得了白纤病毒科尤库病毒属中1株核苷酸长度为5008 bp的Lihan病毒序列。遗传进化分析发现贵州省蜱携带的Lihan蜱病毒与2019年在重庆市微小扇头蜱中发现的Lihan蜱病毒分离株序列(ON812189)同源性最高,而与埃及裂谷热病毒(DQ375403)和中国的发热伴血小板减少综合征病毒(JQ733567)(即现大别班达病毒)处于不同遗传进化分支。结论在贵州省印江县的蜱中发现了3个科的病毒,分别为白纤病毒科、弹状病毒科和楚病毒科。需要更多的研究来进一步了解这些蜱携带病毒的致病性和公共卫生学意义,尤其是本研究中发现的Lihan病毒。

关键词： 非洲猪瘟病毒(ASFV)   间接ELISA方法   P54蛋白   原核表达  

摘要： 【目的】建立一种具有良好特异性和敏感性的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体间接ELISA检测方法。【方法】根据ASFV P54蛋白基因序列进行大肠杆菌密码子优化,将优化后的P54序列克隆到pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET28a-P54,利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,以纯化的P54蛋白作为检测抗原进行包被,建立一种间接ELISA方法,对包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育等反应条件进行优化后,对其临界值、特异性、灵敏性和重复性进行验证。【结果】SDS-PAGE结果显示,P54蛋白分子质量为42 ku,纯度在95%以上;Western blotting结果显示,P54蛋白与ASFV阳性血清能产生特异性反应。优化后的ELISA反应条件为:0.3125μg/mL抗原37℃包被1 h,5%脱脂奶粉37℃封闭1 h,1∶800稀释的血清37℃孵育2 h,1∶15000稀释的酶标二抗37℃孵育1 h。该ELISA检测方法仅与ASFV阳性血清产生特异性反应,与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和乙型脑炎病毒的阳性血清均无明显交叉反应;该方法灵敏性较高,ASFV阳性血清稀释度为1∶3200时仍有明显反应。批间重复和批内重复变异系数均<10%;与商品化试剂盒相比,其阳性符合率为95.45%,阴性符合率为96.05%,总符合率为95.83%。【结论】本研究建立了一种以ASFV P54蛋白为检测抗原的ASFV间接ELISA方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能运用于ASFV的血清学检测,为非洲猪瘟的快速诊断提供更多选择。

关键词： 伪狂犬病病毒   植物源抗病毒分子   宿主防御肽   I型干扰素   干扰素刺激基因   细菌代谢物   真菌代谢物  

摘要： 伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)是疱疹病毒科水痘病毒属的成员,主要引起以母猪流产、仔猪神经和呼吸道症状为特征的伪狂犬病,对生猪养殖生产造成极大的威胁。疫苗免疫是预防猪伪狂犬病最重要的措施,但因病毒发生变异和具有潜伏感染特性,导致传统疫苗防治效果不佳。因此,临床上急需新的药物制剂辅助疫苗免疫来防治该病。研究发现,天然植物类多糖及黄酮、酚、酸等小分子物质能够通过直接抑制病毒感染过程或者通过调节免疫反应抑制PRV感染。另外,宿主抗病毒蛋白I型干扰素及其下游干扰素刺激基因对PRV的感染也具有显著的抑制作用,抗菌肽和防御素等宿主防御肽对PRV的感染也有较好的抑制作用。另外,研究人员最近发现,细菌和真菌的提取物及其代谢产物也具有抗PRV的作用,未来有望将细菌和真菌及其产物应用于病毒病的防控和治疗。本文重点讨论了近年天然生物活性分子抗PRV感染的相关研究进展,以期为抗PRV感染药物的研发提供重要参考。

关键词： 分子印迹法   葡萄糖检测   电化学   生物传感器   银纳米线  

摘要： 通过在银纳米线上沉积3氟苯硼酸接枝的3,4-乙烯二氧噻吩(EDOT-FPBA)和葡萄糖,制备了一种基于表面分子印迹(MIP)法的葡萄糖生物传感器。在玻碳电极(GCE)表面依次沉积银纳米线(AgNWs)、EDOT-FPBA和葡萄糖,然后洗脱葡萄糖模板后得到分子印迹葡萄糖生物传感器。采用电化学阻抗法检测葡萄糖,在0.05~20.00 mmol/L范围内,葡萄糖浓度与电荷转移电阻呈线性关系,检测限低至0.03 mmol/L(R2=0.9905)。此外,该传感器具有良好的特异性、稳定性、可重复使用性和存储稳定性,并且可在生理pH下对葡萄糖进行灵敏检测。