关键词:
猴痘病毒
融合蛋白
原核表达
免疫原性
摘要:
猴痘病毒(Monkeypox virus,MPXV)是一种能够感染人和动物的痘病毒,已对人类公共卫生安全构成巨大威胁,安全高效的疫苗能够有效预防和控制病毒的传播。本研究选取MPXV A29L、A35R和M1R氨基酸序列通过柔性Linker(GGGGS)连接设计融合蛋白,并根据大肠杆菌密码子偏嗜性对其密码子优化后合成全基因,插入pET-28a载体,构建pET28a-A29L-A35R-M1R重组质粒。转化至*** BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,经SDSPAGE和Western blot进行鉴定,并确定最佳诱导条件。在此基础上,对融合蛋白rA29L-A35R-M1R进行Ni-NTA亲和层析柱纯化后,免疫小鼠。通过ELISA方法检测抗MPXV A29L、A35R和M1R特异性IgG和细胞因子(IFN-γ、IL-2和IL-4)水平,评价融合蛋白免疫原性。实验结果显示:重组质粒pET-28a-A29L-A35R-M1R在*** BL21(DE3)感受态细胞中成功表达,最佳表达条件为37℃、0.25 mmol/L IPTG诱导5 h;将纯化的融合蛋白rA29LA35R-M1R免疫小鼠3次后,能够产生抗A29L、A35R和M1R特异性IgG,其中anti-rA29L-A35R-M1R IgG水平最高,且融合蛋白rA29L-A35R-M1R能够刺激机体产生高水平IFN-γ,IL-2和IL-4,与对照组差异均具有统计学意义(P<0.01)。由此表明,融合蛋白rA29L-A35R-M1R具有良好的免疫原性。为猴痘病毒新型疫苗和治疗性生物制剂的研发提供理论依据。