关键词:
犬瘟热病毒
F蛋白
原核表达
单克隆抗体
摘要:
为制备犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)融合蛋白(F)单克隆抗体,研究通过PCR扩增CDV F蛋白胞外区基因,将其克隆至pET-28a原核表达载体,并构建pET-28a-CDV-F重组质粒;将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度为0.2 mmol·L^(-1)的IPTG在37℃诱导6 h后,SDS-PAGE检测表达产物,结果显示在约33 kDa处出现目的条带,且该蛋白主要以包涵体形式表达。Western blot结果表明,重组F蛋白可特异性识别抗His标签单克隆抗体和CDV阳性血清。将重组F蛋白采用切胶纯化法纯化后,以此为免疫原免疫BALB/c小鼠4次,取脾细胞与SP2/0细胞融合,以重组F蛋白为包被抗原,应用间接ELISA检测方法与有限稀释法筛选阳性杂交瘤细胞,最终筛选得到2株单克隆抗体(命名为1B6、1G8);经抗体亚类试剂盒鉴定,2株单抗均属于IgM/κ型;Western blot结果表明2株单克隆抗体均能与重组F蛋白特异性结合。在CDV感染的细胞上进行间接免疫荧光试验,2株单克隆抗体均能识别CDV3疫苗株和LN(10)1野毒株。综上,CDV F蛋白单克隆抗体的制备为CDV的检测奠定基础。