关键词： 新型冠状病毒   刺突蛋白   变异  

摘要： 新型冠状病毒(简称新冠病毒,Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)从发现到现在已流行4年,新冠病毒感染不但造成人类健康问题,也给公共卫生和医疗系统造成了严重负担,社会影响深刻。早期研发的新冠病毒疫苗非常有效,然而,随着新冠病毒在人群间不断流行,新冠病毒在不停地快速演变,在过去三年中,多种新冠病毒变种同时在全球范围传播交替流行。如今,新兴的新冠病毒奥密克戎(Omicron)谱系通过点突变和重组突变正在快速产生替代品,从而逃脱针对新冠病毒的中和抗体。刺突(Spike)蛋白作为主要诱导新冠病毒中和抗体的抗原,对其变异进化特征的绘制及生物学特性研究,不但有助于我们理解新冠病毒抗原是如何进化,也能为不同新冠病毒变异谱系是否发生免疫逃逸进行评估与预测。将重点关注新冠病毒刺突蛋白的进化变异及其改变后带来的生物学特性的改变。

关键词： HIV-1   CRISPR/Cas13a   分子对接   RNA编辑  

摘要： 目前基于规律成簇的间隔短回文重复(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(Cas)系统的基因治疗在遗传病、肿瘤及感染性疾病等领域均取得重大突破,其中Cas13a属于VI型CRISPR系统,Cas13a蛋白在HIV感染细胞内crRNA的引导下定位目标RNA,切割核酸,同时激活Cas13a蛋白的附属效应(Collateral effect)可高效切割细胞内非特异性单链RNA,从而诱导感染细胞凋亡,进一步破坏病毒库,是最有可能功能性治愈HIV的策略。本研究旨在筛选靶向HIV-1的高灵敏度crRNA,进一步探索组合不同crRNA对HIV-1的抑制效果,并在细胞转染水平证明Cas13a/crRNA系统的附属切割活性及其诱导细胞凋亡。在LANL数据库中比对HIV-1各亚型毒株序列,获得各功能蛋白高度保守区。同时,结合HIV数据库中RNA的剪接供体及受体位点信息;然后利用MPRDOCK软件进行crRNA与LwCas13a的分子对接并计算结合复合物的自由能大小选定一组crRNA池;再以荧光标记RNA探针与LwCas13a蛋白组成可视化检测体系,以FAM荧光信号强弱确定了最有效的crRNA。构建LwCas13a和crRNA的共表达质粒,通过共转染HIV全长感染性克隆质粒和含单个或多个crRNA组合的LwCas13a的表达质粒到HEK293T细胞中,根据转染细胞及其上清再感染细胞中萤光素酶和病毒结构蛋白RNA表达水平来判定CRISPR-Cas13a系统对HIV基因表达的抑制效率。初步筛选出优选的27条crRNA并结合切割荧光强弱从中筛选出8条高灵敏度crRNA。细胞共转染实验表明,靶向病毒结构基因的单个crRNA,crGag2,crPol1,crA53能降低HIV-1子代病毒RNA表达降低了43.2%~58.3%,同样,再次感染实验也证明子代病毒活性滴度降低了38%~74.6%。进一步的结果证明,4个crRNA(crD15,crA53,crGag2,crPol1)联用比单个crRNA表达降低了86.4%,比两个crRNAs降低了64.9%,同时在共转染HEK293T细胞中观察到Cas13a蛋白的附属切割活性及其诱导细胞凋亡。我们建立的CRISPR/Cas13a系统能够显著抑制HIV病毒复制和子代病毒产生并诱导细胞凋亡,为HIV的治疗提供了一种新的工具。

关键词： 检验生化指标   病毒肝性病   临床价值  

摘要： 就针对病毒肝性病患者的诊断中,检验生化指标的价值进行分析。方法 随机选取2023年2月到次年2月因为病毒性肝炎于同一医院接受寻求医疗干预的患者总共60例作为研究的试验组组;再选择60例健康志愿者为对照组,通过生化指标检验,对比两组患者肝部等生化指标差距。结果 实验组CHE较低,AST、ALT、TBIL较高,血常规指标较低,肝癌的LAP水平高,而肝硬化的ADA水平高,肝癌和肝硬化的PA水平低,慢性肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌阳性率显著高于对照组(P<0.05)。结论 病毒性肝病患者的生化指标与健康人群有显著不同,可根据相关指标数值变化诊断病情,值得在临床上广泛应用。结论 生化指标对于区分病毒性肝病患者、健康人群之间有突出的作用,可为临床实践中针对病毒性肝病患者的准确诊断提供基础。

关键词： 间质性肺病   急性加重   人类疱疹病毒7   危险因素   宏基因组二代测序  

摘要： 目的分析间质性肺病急性加重(AE-ILD)患者的病毒感染情况及对预后的影响。方法选择2021年3月—2023年6月徐州医科大学附属医院呼吸与危重症医学科收治的107例AE-ILD患者为研究对象。通过宏基因组二代测序(mNGS)技术对患者的血液、痰液及支气管肺泡灌洗液标本进行病毒检测。分析患者病毒感染情况及影响患者预后的危险因素。结果共88例AE-ILD患者检出病毒感染,占比为82.24%,其中EB病毒检出率最高,占AE-ILD患者的56.07%。AE-ILD患者病毒阳性组与阴性组的性别、年龄、降钙素原(PCT)、脑利尿钠肽(BNP)、乳酸脱氢酶(LDH)、氧合指数、入住重症监护室(ICU)及90 d死亡例数比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与AE-ILD患者病毒感染存活组相比,死亡组患者更易感染人类疱疹病毒1型(HHV-1,χ^(2)=6.180,P=0.013)及HHV-7(χ^(2)=8.552,P=0.003)。多因素logistics回归分析显示,感染HHV-7(OR:5.528,95%CI:1.335~22.886,P=0.018)及高LDH(OR:1.005,95%CI:1.000~1.009,P=0.031)是AE-ILD患者预后不佳的独立危险因素。结论EB病毒是AE-ILD患者病毒感染最常见的类型。感染HHV-7及高LDH是AE-ILD患者预后不良的危险因素。

关键词： 艾滋病病毒感染者/艾滋病患者   快速启动   抗病毒治疗   影响因素   枣庄市  

摘要： 随着我国“四免一关怀”政策的实施和三个95%目标的制定,艾滋病c ART覆盖率进一步提升,极大程度降低了艾滋病病死率^([1])。快速启动抗病毒治疗定义为确诊HIV感染后7天内启动c ART^([2]),我国也在建议HIV感染者应尽快启动cART^([3-4])。枣庄市自2000年报告首例HIV感染者以来,病例报告数量逐年增加^([5]),为推动本地区快速启动抗病毒治疗的工作进一步开展,本研究对枣庄市2016-2022年HIV/AIDS患者快速启动抗病毒治疗情况及影响因素进行分析,现报告如下。

关键词： 慢性乙型病毒性肝炎   心理困扰   社会支持   心理弹性   病程  

摘要： 目的探讨慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者心理困扰水平的影响因素,以指导临床干预措施的拟定,减轻CHB患者的心理困扰水平。方法选取2020年9月至2023年9月萍乡市第二人民医院收治的80例慢性乙型病毒性肝炎患者作为研究对象,评估所有患者的心理困扰水平[心理困扰量表(Kessler-10)],设计基线资料调查表,详细统计所有患者的基线资料,比较不同资料特征CHB患者的Kessler-10评分,重点分析CHB患者心理困扰水平的影响因素。结果经评估,80例CHB患者的Kessler-10评分为(23.45±3.34)分;不同病程、心理弹性、社会支持及合并基础疾病CHB患者的Kessler-10评分比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、抗病毒治疗、家庭月人均收入、家族史、文化水平及婚姻状况CHB患者的Kessler-10评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);经多元线性回归分析发现,病程长、心理弹性低下、合并其他慢性病及社会支持低均是CHB患者心理困扰水平的影响因素(P<0.05)。结论CHB患者心理困扰呈中等水平,CHB患者心理困扰水平的影响因素为病程长、心理弹性低下、合并其他慢性病及社会支持低。

关键词： 中医处方   方剂配伍   数据挖掘   关联规则分析   病毒感染   四气   中药处方   中药组方  

摘要： 新型冠状病毒(以下简称新冠病毒)感染持续保持低水平波浪式的流行态势,但新冠病毒仍在传播、变异,甚至引发死亡.中药在预防和控制流行病的过程中起着重要作用,其能够缓解症状,缩短住院时间,提高实验室指标,并延缓病情由轻中度发展为重度,提高治愈率,降低死亡率,促进康复.中医处方信息数据错综复杂,方剂配伍包含了"病-证-方-药-量"的多维关联,其本质就存在一种数据关系.利用数据挖掘技术对新冠病毒患者的中药饮片处方进行分析,对后续新冠病毒感染引起的疾病治疗,具有十分重要的研究价值和临床意义.本项目提出了一种利用IBM SPSS Modeler软件对电子处方进行数据处理和数据挖掘的方法,对中药处方包括药物频次、四气、五味、归经、功效进行关联规则分析、聚类分析、网络复杂分析,并对病例包括病位、病性、证型进行数据挖掘,为优化新冠病毒感染的中药组方研究提供参考.

关键词： 伪狂犬病病毒   环介导等温扩增技术   Taqman   检测方法  

摘要： 基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和荧光定量PCR技术建立一种猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)LAMP-Taqman快速检测体系。针对PRV保守序列设计LAMP引物组,并将环引物修饰荧光基团和淬灭基团作为Taqman探针,以实际阳性样本和重组质粒为模板,测试体系组分添加量、特异性、灵敏度和重复性;同时,使用市售恒温检测试剂盒平行测试38份实际样本,验证LAMP-Taqman检测体系的实际检测效果。结果显示,各组分最佳终浓度为:PRV-FIP/BIP 0.8μmol/L,Bst DNA聚合酶0.7 U/μL,TaqDNA聚合酶0.24 U/μL,dNTPs 1.6 mmol/L,MgSO_(4)7.2 mmol/L;体系特异性好,不与其他病毒样本产生交叉反应,梯度样本的线性相关系数(R^(2))为0.995,重复性测试的变异系数小于3.000%,最低检出限可达2.81×10^(2)拷贝/μL;对实际样本的测试结果与市售恒温荧光法检测试剂完全一致。结果表明,基于LAMP-Taqman方法建立的PRV检测体系特异灵敏、稳定准确,是一种适用于猪群PRV精准检测的可靠技术方法。

关键词： 婴幼儿   呼吸道合胞病毒   特异性免疫   被动免疫   专家共识  

摘要： 呼吸道合胞病毒(RSV)是严重威胁婴幼儿健康最常见的病毒性病原体,引起的疾病负担重。为了更好地指导和规范我国婴幼儿RSV相关疾病的被动免疫预防工作,中华预防医学会联合多学科专家组成专门工作组,借鉴国外RSV被动免疫预防的实施经验,以问题为导向,整合了现有的证据和最新进展,形成了我国婴幼儿RSV被动免疫预防专家共识,旨在从技术上回答有关RSV感染及其免疫预防特别是被动免疫预防的一些专业问题,以期为各级医疗机构、疾病预防控制机构和基层医疗机构专业人员的免疫预防实践提供参考。

关键词： 十足目虹彩病毒1(decapod iridescent virus 1,DIV1)   荧光定量PCR   SYBR GreenⅠ   检测方法  

摘要： 为建立十足目虹彩病毒1(decapod iridescent virus 1,DIV1)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,根据DIV1的MCP和ATPase基因序列,设计并筛选出引物,以制备的DIV1阳性质粒标准品为模板构建标准曲线,建立DIV1的SYBR Green I qPCR方法,并对该方法进行临床初步应用。结果显示,建立的qPCR方法阈值循环数(cycle threshold value,Ct)与标准品拷贝数的对数线性关系良好,标准曲线相关系数(R^(2))为0.999;对DIV1阳性的虾蟹核酸样本能够进行特异性扩增,但对传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)和白斑综合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)阳性核酸样本均无扩增;最低检测限为9.77 copies/μL;Ct值的组内和组间变异系数均小于1%。运用该方法对70份疑似感染DIV1的虾蟹类样本进行DIV1检测,该方法阳性率为48.57%,与套式PCR检测方法的阳性率一致;利用建立的方法对DIV1阳性三疣梭子蟹的血淋巴、肝胰腺及心脏等组织进行定量检测分析,结果显示各组织中均存在DIV1,其中血淋巴中DIV1平均拷贝数最高。研究表明,建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于对DIV1的快速、定量检测,对十足目虹彩病毒病的诊断和防控具有重要意义。