关键词： 造血干细胞移植   呼吸道合胞病毒   移植物抗宿主病   免疫抑制剂  

摘要： 目的探究成人血液病患者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后呼吸道合胞病毒(RSV)感染的临床特征及死亡相关危险因素。方法纳入2023年10月至2024年1月期间在北京大学人民医院血液科检出RSV阳性的allo-HSCT患者, 对其临床资料进行回顾性分析, 采用二元Logistic回归分析死亡相关危险因素。结果共纳入移植后RSV检测阳性患者43例, 男26例, 女17例, 中位年龄42(21~66)岁。急性髓系白血病25例, 急性淋巴细胞白血病9例, 骨髓增生异常综合征6例, 再生障碍性贫血1例, 淋巴瘤1例, 混合性白血病1例。单倍体移植33例, 同胞全相合移植8例, 无关供者移植2例。20例(46.5%)患者因RSV感染或合并其他感染发生低氧血症, 6例(14.0%)转ICU治疗, 4例(9.3%)气管插管辅助通气, 7例(16.3%)患者死亡。死亡患者感染RSV时PLT较低[15.0(10.0~62.0)×10^(9)/L对74.5(8.0~348.0)×10^(9)/L, P=0.003], 合并细菌感染比例较高(85.7%对41.7%, P=0.046), 血液学复发比例较高(71.4%对13.9%, P=0.004)。血液学复发(OR=15.500, 95%CI 2.336~102.848, P=0.005)、甲型流感病毒感染(OR=14.000, 95%CI 1.064~184.182, P=0.045)、感染RSV时PLT较低(OR=0.945, 95%CI 0.894~0.999, P=0.048)是移植后患者死亡的危险因素。结论 allo-HSCT后感染RSV的成人血液病患者预后不良。

关键词： 布地奈德   呼吸道合胞病毒   肺功能   Treg/辅助性T17细胞   肺炎  

摘要： 目的探究布地奈德对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱发幼龄小鼠肺炎性损伤的作用。方法72只BABL/c幼龄小鼠随机分为健康对照组、RSV组、低剂量组、中剂量组、高剂量组以及阳性对照组,每组12只。健康对照组鼻腔滴注50μl生理盐水,其余5组给予RSV-long株病毒用于建模。健康对照组和RSV组雾化吸入等量生理盐水,低、中以及高剂量组雾化吸入0.2、0.8以及1.5 mg/kg布地奈德混悬液,阳性对照组雾化吸入46 mg/kg利巴韦林,一日1次,持续7 d。比较小鼠肺指数、肺湿/干重比(wet/dry,W/D)、肺功能以及RSV载量;流式细胞术检测Treg/辅助性T细胞(help T cell,Th17);酶联免疫吸附试验测定白介素(interleukin,IL)-17、IL-21以及IL-22水平;蛋白质印迹法检测核因子(nuclear factor,NF)κB蛋白。结果与健康对照组相比,RSV组肺指数、W/D、RSV载量、呼气峰值流速(peak exhalation flow,PEF)、吸气阻力(resistance inspiratory,RI)、呼气阻力(resistance exhalation,RE)、Th17比例、肺组织和血清IL-17、IL-21、IL-22、NF-κB蛋白增加,动态肺顺应性(dynamic lung compliance,Cdyn)、Treg以及Treg/Th17比例降低(P<0.05);与RSV组相比,低、中、高剂量组及阳性对照组肺指数、W/D、RSV载量、PEF、RI、RE以及Th17比例、肺组织、血清IL-17、IL-21、IL-22以及NF-κB蛋白降低,Cydn、Treg以及Treg/Th17比例增加(P<0.05)。结论布地奈德可通过调节NF-κB容量减轻RSV诱发幼龄小鼠肺炎性损伤,改善Treg/Th17比例。

关键词： CRISPR   分子诊断   Ⅱ类Cas蛋白   病毒检测   小分子检测  

摘要： 2019年,新型冠状病毒感染疫情的爆发对快速、特异、灵敏、简便且廉价的诊断技术提出了迫切需求,分子诊断技术成为备受关注的热点。但目前常用的聚合酶链反应分子诊断技术存在诸多局限性。近年来,新兴的规律间隔成簇短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas)系统作为新型基因编辑工具为解决上述需求提供了可能。本研究综述了CRISPR/Cas系统的作用机制,并以不同Cas蛋白类型为线索,重点综述了多种CRISPR分子诊断技术及平台的原理及应用,同时关注其在病毒检测领域中的研究进展,并对CRISPR分子诊断技术的发展现状进行了总结。尽管CRISPR分子诊断技术目前处于起步阶段,存在污染、脱靶效应及序列依赖等局限性,该技术在分子诊断领域仍表现出革命性的发展潜力。

关键词： 宣肺败毒颗粒   流感病毒(A/PR/8/34)   流感病毒肺炎   T细胞  

摘要： [目的]确定宣肺败毒颗粒在低温高湿环境下,A/PR/8/34(H1N1)流感病毒肺炎小鼠模型的治疗效果及作用机制。[方法]将ICR小鼠置于具有低温高湿环境的人工气候箱中,滴鼻给予流感病毒(A/PR/8/34)建立流感病毒肺炎模型。造模后第5天对小鼠每日给予宣肺败毒颗粒灌胃5 d,观察记录小鼠的行为学评分、体质量、脏器指数、肺部病毒载量、肺部影像学及形态学变化,蛋白印迹法检测炎症关键蛋白NF-κB的表达变化,流式细胞术检测宣肺败毒颗粒对小鼠免疫应答的调节。[结果]与模型组相比,宣肺败毒颗粒给药后小鼠表现出活跃程度上升、大便性状正常、肺部病毒载量降低、小鼠肺部炎性渗出减少,p-NF-κB P65表达降低,CD4+和CD8+T细胞百分比增高。[结论]宣肺败毒颗粒增加T细胞数量,减轻流感病毒肺炎小鼠的炎症反应。

关键词： 猪瘟   E2   单B细胞   表位   ELISA  

摘要： 本研究旨在建立一种猪瘟病毒E2单抗竞争ELISA检测方法,用于评价猪瘟C株弱毒苗和E2亚单位疫苗的免疫效果。首先,构建猪瘟E2杆状病毒表达载体pFastBAC,通过悬浮培养SF9细胞高效表达E2蛋白;其次,用纯化的E2蛋白免疫BABL/c小鼠,通过流式分选IgM-PE-/E2-APC+型单个B细胞。然后,利用半巢式PCR分别扩增E2特异性IgG抗体的重链和轻链,测序后将抗体重链及轻链构建到pCDNA3.1载体,再将构建好的质粒共转染至HEK-293细胞,制备猪瘟E2单克隆抗体。结果表明,本研究通过单B细胞分选技术获得的两株单克隆抗体,即mAb3A9(IgG1,kappa)和mAb4F7(IgG2a,lambda),分别识别猪瘟E2蛋白B细胞线性表位25GLTTTWKEYSHDLQL^(39)和259GNTTVKVHASDERGP^(273)。此外,用上述两株单克隆抗体及E2蛋白建立的单抗竞争ELISA检测方法,在血清样本检测过程中,均展现出优异的诊断敏感性(97.49%,95.97%)及特异性(96.08%,94.38%),该研究为我国猪瘟的逐步净化提供了有利的技术支撑。

关键词： 急性腹泻患儿   粪便   诺如病毒   反转录-聚合酶链反应  

摘要： 目的分析急性腹泻患儿粪便诺如病毒GⅠ/GⅡ型实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果。方法选择2023年1月至2024年1月南昌大学第一附属医院赣江新区医院急性腹泻患儿150例,均采用实时荧光RT-PCR技术检测粪便样本诺如病毒GⅠ/GⅡ型,并对检测结果进行统计分析。比较不同特征急性腹泻患儿诺如病毒阳性率、不同年龄段诺如病毒阳性与阴性病例症状、不同年龄段及发病季节诺如病毒阳性患儿基因型分布情况。结果150例急性腹泻患儿的150份粪便样本中共检出诺如病毒阳性42份(28.00%);不同性别、户籍患儿诺如病毒阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);春、冬季诺如病毒阳性率高于夏、秋季,差异有统计学意义(P<0.05);<1岁急性腹泻患儿诺如病毒阳性率高于1~5岁、6~12岁患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。<1岁急性腹泻患儿中,诺如病毒阳性病例呕吐、腹泻<5次/d占比高于阴性,差异有统计学意义(P<0.05);1~5岁、6~12岁急性腹泻患儿中,诺如病毒阳性与阴性病例发热、呕吐、腹泻症状比较,差异无统计学意义(P>0.05);急性腹泻诺如病毒阳性患儿中,包括GⅠ型3例(7.14%)、GⅡ型38例(90.48%)、GⅠ/GⅡ混合型1例(2.38%);与其他年龄段比较,6~12岁GⅠ型占比(25.00%)较高;与春、冬季比较,夏、秋季GⅠ型占比(16.67%、20.00%)较高,春、冬季GⅡ型占比(100.00%、91.30%)较高。结论南昌市西湖区急性腹泻患儿诺如病毒阳性率较高,以GⅡ型为主,且好发于<1岁患儿及春季与冬季。

关键词： 鼠细小病毒   A9细胞   感染复数   感染性滴度   响应面法   病毒悬液   上清   沉淀  

摘要： [目的]研究鼠细小病毒(MMV)感染性滴度测定方法,同时制备高滴度的MMV。[方法]通过Box-Behnken设计-响应面法优化A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。[结果]A9细胞的最佳接种浓度、病毒培养时间及病毒吸附时间分别为9×10^(3)个/孔、12 d及0 h,所建立的检测方法精密性较好;A9细胞沉淀中病毒滴度高于上清,且随病毒MOI值的升高而逐渐增加,在MOI为0.5时,感染后72 h收获,病毒滴度最高。[结论]Box-Behnken设计-响应面法适用于A9细胞制备MMV及MMV感染性滴度测定工艺。制备的病毒液的平均滴度为6.35TCID_(50)/0.1 mL。

关键词： 狂犬病病毒   G蛋白   抗原位点Ⅳ区   多克隆抗体  

摘要： 基于大肠杆菌原核表达的G重组蛋白缺少糖基化修饰,诱导机体产生中和抗体的能力较弱。为制备G蛋白多克隆抗体,针对G蛋白抗原Ⅳ区第251位氨基酸的中和抗原表位,以日本RABV疫苗株RC-HL的G蛋白序列为模板,设计了含有17个氨基酸的多肽序列MQTSDETKWCPPDQLVN(G17),合成后偶联KLH蛋白,与弗氏佐剂乳化后免疫小鼠,采集血液分离血清获得抗G蛋白多克隆抗体。实验显示,制备的多克隆抗体效价在1∶500以上,在1∶200的稀释度下,可以对原核表达的G重组蛋白、真核表达的G重组蛋白进行Western Blot检测。基于狂犬病病毒G蛋白抗原位点Ⅳ区制备获得的抗G蛋白多克隆抗体具有反应性好及特异性强的特点,能够用于检测G重组蛋白,为进一步研究G蛋白功能、研发单抗和设计疫苗打下良好基础。

关键词： 赤藓红   光动力效应   甲型流感病毒   灭活效果  

摘要： 目的研究赤藓红介导的光动力效应对甲型流感病毒的灭活效果。方法采用细胞培养法,对赤藓红介导的光动力效应灭活甲型H1N1、H3N2和H9N2流感病毒的效果进行观察。结果用50μmol/L的赤藓红经蓝色LED光照5 min,对甲型H1N1、H3N2和H9N2流感病毒的平均灭活对数值依次为5.44、2.56和4.89 TCID50。赤藓红介导的光动力效应对不同材质物体表面甲型H1N1、H3N2和H9N2流感病毒灭活率依次为≥99.99%、≥99.72%和≥99.97%。结论赤藓红介导的光动力效应对甲型H1N1、H3N2和H9N2流感病毒具有良好的灭活效果。

关键词： 艾滋病   抗病毒治疗   CD4细胞  

摘要： 目的分析HIV感染者/AIDS患者中不同人群抗病毒治疗后CD4+T淋巴细胞(以下简称为CD4细胞)动态变化情况,旨在了解不同人群抗病毒治疗后CD4细胞的变化特点,为临床诊疗提供依据。方法采用回顾性队列研究的方法,根据纳入和排除标准,对云南省某医院2018—2019年2年间接受治疗的HIV感染者/AIDS患者进行了系统筛选,共纳入符合要求的患者605例作为研究对象。对抗病毒治疗的基线以及6、12、18、24个月的CD4细胞计数水平进行分析,以HIV感染者/AIDS患者基线采血时间为起点,最后随访时间为终点。结果605例患者中,年龄≤30岁的患者抗病毒治疗后CD4细胞水平高于>30岁的患者;未婚的患者CD4细胞水平高于其他婚姻状况的患者;使用A组、C组和E组治疗方案的患者CD4细胞水平比B组、D组患者高。患者在抗病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)开始的6个月内CD4细胞计数增长较快,基线CD4细胞≤200个/μL的患者治疗2年后CD4细胞仍未达到正常水平,基线CD4细胞>200个/μL的患者ART后CD4细胞始终处于较高水平,治疗2年后达到正常水平。结论ART早期为CD4细胞的快速增长期,越早进行ART,CD4细胞水平恢复越快,HIV感染者/AIDS患者免疫功能恢复越好。因此我们应加大监测检测力度,越早发现感染者将越容易进行免疫功能重建,提高治疗效果,减少死亡风险,延长患者寿命。