关键词:
鸭腺病毒
分离鉴定
遗传进化分析
生物信息学
摘要:
旨在对鸭腺病毒3型(duck adenovirus 3,DAdV-3)广东流行株进行分离,并预测分析六邻体(Hexon),五邻体(Penton),纤维蛋白(Fiber1、Fiber2)4个主要结构蛋白的理化性质、结构及功能。本研究用鸡肝癌细胞(LMH)对疑似DAdV-3感染的鸭、鹅肝脏组织进行病毒分离,对3株病毒分离株主要结构蛋白进行基因克隆、测序、拼接,获得4个蛋白的核苷酸序列后,使用MEGA 11软件进行氨基酸序列分析并构建遗传进化树,利用Expasy-ProtParam与SOPMA软件分析4个蛋白的理化性质与二级结构,应用AlphaFold2软件预测4个蛋白的三级结构,并对4个蛋白的线性B细胞抗原表位进行预测。结果:成功分离得到3株DAdV-3,命名为XZD-2021株、FRK-2021株、825-1-2021株;3株DAdV-3的4个蛋白均与GenBank中其他DAdV-3分离株处于同一分支中;Hexon蛋白更接近鹅腺病毒4型,Penton蛋白更接近D种禽腺病毒,Fiber1、Fiber2蛋白则更接近鸽腺病毒1型;4个蛋白均为酸性亲水蛋白,无信号肽,Hexon、Fiber1、Fiber2蛋白以自由卷曲为主,Penton蛋白则以α螺旋为主;三级结构预测结果与二级结构结果相符,线性B细胞抗原表位预测发现,Hexon蛋白的线性B细胞抗原表位最多,为11个,Penton蛋白与Fiber2蛋白为6个,Fiber1蛋白为5个,但Fiber1蛋白位于病毒表面的抗原表位最多,表位长度较Fiber2更长,且多位于负责与宿主细胞受体结合的头节区。综上,本研究成功分离得到3株DAdV-3,并对其4个主要结构蛋白进行了遗传演化、二级结构、三级结构等生物学特性进行分析,研究结果为后续DAdV-3致病特性和免疫特性研究奠定基础。