关键词： 哺乳动物细胞   培养制备   充足蛋白质药物   进展分析  

摘要： 在目前制药领域,利用哺乳动物细胞制备充足蛋白质药物取得了积极进展,哺乳动物细胞制备的蛋白质药物以其具有与天然蛋白质相似的特性而取得了重要应用。从蛋白质药物制造技术发展来看,考虑到哺乳动物细胞培养制备的蛋白质药物质量较高,并且制备过程难度低、制备成本不高,由此决定了哺乳动物细胞培养制备充足蛋白质药物将在未来的制药领域取得全面发展和应用。基于这一认识,我们应认真总结哺乳动物细胞培养制备充足蛋白质药物取得的进展,并深入探讨哺乳动物细胞培养制备充足蛋白质药物技术的发展前景,做好哺乳动物细胞培养制备充足蛋白质药物的研制工作。

关键词： 模拟失重   细胞培养装置   随机回转器   研制  

摘要： 目的设计一种细胞培养装置,使其适合在随机回转(random positioning machine,RPM)条件下进行动物细胞培养。方法根据在RPM条件下进行动物细胞培养的相关要求,提出总体设计方案,包括培养盒、培养小室及密封装置三个模块的设计方案;采用此装置培养MC3T3-E1成骨样细胞,从细胞形态、面积和活性3方面评价其培养效果。结果研制的细胞培养装置操作简单,密封效果好;与传统细胞培养瓶相比,采用此装置培养细胞培养基用量少,且细胞铺展面积和活性增加。结论研制出一种可用于RPM模拟失重生物效应研究的动物细胞培养装置,为进一步的研究RPM对动物细胞的影响奠定基础;该装置还可用于地面其它密闭系统细胞培养实验。

关键词： 动物细胞  

ISBN: (纸本)9787030397188

摘要： 本书共分30章，内容包括：培养细胞的生物学，实验室设计、布局及设备，设备及材料，无菌技术，安全性、生物伦理及验证，培养器皿和附着物，成分明确培养基及补充物等。

关键词： 抗体药物   细胞培养基   动物   畅销药物   国内外   副作用   销售额  

摘要： 近年来，具有靶向明确，副作用小等优势的抗体药物受到国内外药企的广泛关注。2012年，抗体药物全球销售额己达650亿美元左右，并占据全球十大畅销药物的半壁江山。

关键词： 细胞培养   原代细胞   实验材料  

摘要： 细胞培养实验技术对于生物技术、生物科学专业的学生十分重要，培养结果的好坏直接关系着教学效果，培养材料的选取直接影响着培养结果的好坏，本文介绍了动物细胞培养常用的几种材料，并进行实验，分析实验材料对实验结果的影响，为动物细胞培养实验教学选取了最佳的实验材料。

关键词： 植物组织培养   细胞培养   原代培养   传代培养   全能性   动物细胞   细胞分裂素   愈伤组织分化   生长素   植物细胞   胰蛋白酶   外植体   单倍体育种   脱毒植株  

摘要： 一、考情分析植物组织培养在农业生产中的应用、动物细胞培养的过程及影响因素一直是高考命题的热点。命题会利用信息材料为背景以图解的形式考查有关植物组织培养的相关知识,或结合植物育种、动物细胞培养等知识进行综合考查。二、复习建议本部分题目中常出现操作流程图或装置

关键词： 一次性三棱锥型软膜生物反应器   动物细胞悬浮培养   KLa   细胞密度   病毒扩增   三维回旋仪  

摘要： 生物反应器是临床细胞治疗和生物制药的必要设备。帕金森病、阿尔兹海默病和多系统萎缩等神经系统变性病的发病率逐年升高，但是目前尚缺少有效的治疗方法。细胞修复治疗和基因治疗有望为这些神经系统疾病的治疗提供新的希望和重要途径，实现神经系统疾病的细胞修复治疗和基因治疗需要足量的神经干细胞和病毒载体，为解决目前不能规模化扩增的瓶颈，需要探索一种最佳的生物反应器来满足神经干细胞的大规模悬浮培养和病毒载体的大量扩增。传统的生物反应器如磁力搅拌器，中空纤维膜生物反应器，搅拌罐生物反应器等都是硬质材料，不可变形，非一次性，存在交叉污染风险以及成本高等缺点。为了克服这些缺点，近来我们报道了一种一次性三棱锥型软膜生物反应器，在大肠杆菌的培养过程中已取得高效氧传递速率，可能为培养的动物细胞提供良好溶氧，同时也能够促进病毒扩增。Jurkat细胞是悬浮细胞，与神经干细胞一样，在高浓度的氧气条件下可以获得更快的增殖效率，由于神经干细胞培养成本高，获取途径较少，本实验中以易于培养的Jurkat细胞为培养物，比较三棱锥型生物反应器和磁力搅拌器的培养条件，同时也对腺病毒在二者内的扩增效果作了比较。结果表明:在相同外界条件下，生物反应器可达到高于磁力搅拌器5倍KLa;在KLa相同条件下，可以达到相似的最大活细胞密度及病毒滴度;在磁力搅拌器在75rpm和生物反应器在15rpm转速条件下，生物反应器可以获得高于磁力搅拌器3倍的活细胞密度。结论：一次性三棱锥型软膜生物反应器是一种适用于神经干细胞悬浮培养和腺病毒扩增的重要工具，为神经系统疾病细胞修复治疗和基因治疗提供了一种重要的培养设备。 目的 1.通过比较两种不同的生物反应器的KLa和液流形式，初步研究三棱锥型软膜生物反应器在动物细胞悬浮培养过程中溶氧机制;2.利用三棱锥型生物反应器悬浮培养Jurkat细胞，探索适用于在这种生物反应器内动物细胞悬浮生长的最佳培养条件，有可能为用于细胞修复治疗的神经球悬浮培养提供一种可靠的细胞模型;3.利用三棱锥型软膜生物反应器微载体悬浮培养293A细胞，扩增腺病毒，为神经系统疾病基因治疗提供足量腺病毒载体。 方法 1.通过比较三棱锥型软膜生物反应器在三维回旋CO2培养箱内不同位置（中心，边缘），不同高度（底层，中层和上层）的溶氧有无差异,评估其溶氧的均一性;2.在温度、湿度及CO2浓度相同的条件下，比较三棱锥型软膜生物反应器和磁力搅拌器的体积氧传递系数;3.观察三棱锥型软膜生物反应器和磁力搅拌器的液流形式。 4.比较三棱锥型软膜生物反应器在不同转速条件和不同A/V条件下，对Jurkat细胞增殖的影响，以及在KLa相同的条件下，比较利用三棱锥软膜生物反应器和磁力搅拌器悬浮培养Jurkat细胞有无不同;比较三棱锥型软膜生物反应器15rpm和磁力搅拌器75rpm的最大转速条件下，细胞增殖有无差异。 5.比较在KLa相同的条件下，利用三棱锥软膜生物反应器和磁力搅拌器悬浮培和微载体培养293A细胞产生腺病毒有无差别;结果 1.三棱锥型软膜生物反应器在三维回旋CO2培养箱内不同位置（中心，边缘），不同高度（底层，中层和上层）的溶氧无显著统计学差异;2.在相同外界条件下，三棱锥型软膜生物反应器的体积氧传递系数是磁力搅拌器的5倍;3.三棱锥型软膜生物反应器通过波浪介导氧传递机制优于磁力搅拌器对流和弥散的效果。 4.在10转/分和15转/分条件下的细胞增殖速度均大于静止状态，最大活细胞密度分别是静止状态下的1.51倍和2.86倍;在不同A/V条件下的细胞培养效果和体积氧传递系数一致，KLa越大，细胞增殖率越高;在相同的KLa条件下，两种不同细胞培养系统溶氧浓度和最大活细胞密度无显著统计学差异;在磁力搅拌器在75rpm和生物反应器在15rpm转速条件下，生物反应器可以获得高于磁力搅拌器3倍的活细胞密度。 5.在KLa相同条件下，三棱锥型软膜生物反应器可以达到与磁力搅拌器相似的最大活细胞密度及病毒滴度;结论 一次性三棱锥型软膜生物反应器较传统磁力搅拌器具有较高的氧传递速率，并且通过产生波浪运动介导更高的溶氧浓度和低液流剪切力。一次性三棱锥型软膜生物反应器可以更高效率的扩增腺病毒载体。对于神经干细胞需氧更高和悬浮培养的特点，三棱锥型软膜生物反应器产生的培养条件可能更利于神经干细胞培养培养。所以一次性三棱锥型软膜生物反应器可能为神经系统疾病细胞修复治疗和基因治疗提供了一种重要的培养设备。

摘要： 一、教材分析和教学思路 “动物细胞培养和核移植技术”是人教版高中生物学教材选修3《现代生物科技专题》专题2“动物细胞工程”中第一节内容。本节教学中，采用“内环境稳态和理化性质”的相关知识来探讨动物细胞培养的条件和动物细胞培养过程的注意事项；通过问题探讨和PPT片段，来检验学生对知识理解、掌握和应用能力；通过小组合作学习的方式列举动物细胞培养的应用并尝试用生物学原理进行解释。这样处理的优点是消除学生对本节内容学习的困惑和恐惧，激发学生学习的热情，让学生更容易理解和掌握学习的重点，并明白学习生物学不是靠死记硬背的，而是要建立知识的联系，要学以致用。 二、教学目标 1.知识目标 简述并解释动物细胞培养的条件；简述动物细胞培养的过程和注意事项；理解动物细胞贴壁生长和接触抑制现象；列举动物细胞培养技术的实际应用。 2.能力目标 培养知识的迁移能力；用已学知识“内环境稳态和理化性质”去突破学习难点的能力；解释癌细胞没有接触抑制生长的原因。 3.情感态度与价值观 关注动物细胞培养技术的研究进展和应用前景；认同内环境稳态和理化性质是动物细胞培养的理论基础。 三、教学过程 1.复习已学知识 复习内环境的化学组成、理化性质、内环境稳态和内环境稳态的重要意义等知识点。帮助学生建立新旧知识的联系，并引出本节课的问题研究。 2.问题探究 内环境是人体内细胞生活的液体环境，那么在体外培养哺乳动物细胞应该选择固体培养基，还是液体培养基？根据内环境的化学成分，讨论体外培养哺乳动物细胞必须要提供哪些营养物质？根据内环境稳态的理化性质，探讨体外进行哺乳动物细胞培养的温度、pH和气体条件；血浆的pH之所以稳定在7.35～7.45，是因为有、等，那么在体外培养哺乳动物细胞时，怎样维持pH相对稳定呢？这些问题的探讨是本节课培养学生思维能力和生物学学习观的关键。所以，这个环节要舍得花时间，给学习小组讨论，得出结论。 3.用学生的讨论结果导入新课 用学生探讨的结果，引出本节课的重点内容之一“动物细胞培养的条件”。学生在已学知识的基础上进行新问题的探讨，在取得丰富结果的情况下，整合多个小组合作学习的结果，答案就会接近真实。因为内环境是人体细胞生活的液体环境，体外培养动物细胞，当然选择液体培养基；根据内环境的化学组成，体外培养动物细胞需要的营养物质主要有蛋白质、葡萄糖、氨基酸、无机盐（但是对血清和促生长因子，没有学习小组能写出来，必须引导学生阅读教材，或查阅资料，了解血清和促生长因子在动物细胞培养中的作用）；根据内环境的理化性质，体外培养哺乳动物的渗透压为770 kPa、温度在37℃左右、pH在7.35～7.45之间。通过阅读教材，学生明白多数哺乳动物体温以36.5℃±0.5℃为宜，pH以7.2～7.4为宜；整个培养过程保持无菌无毒状态；是保证培养细胞进行有氧呼吸所必需，其中混有少量有调节培养液pH值的作用。在学生充分讨论并形成上述的认识后，阅读教材，归纳、总结动物细胞培养要满足的条件有：无菌、无毒环境；特定的营养条件、温度和pH以及气体环境。同时，也要学生说出动物细胞培养液的营养成分与植物组织培养基中的营养成分的异同点。

关键词： 细胞培养   生物反应器   c融合蛋白   生产工艺   肿瘤疫苗  

摘要： 目的：<br>　　利用本实验室成功构建的稳定表达可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-脂联素球部-Fc抗体(sTNFRⅡ-gAD-Fc)融合蛋白的重组CHO-S工程细胞株，经过扩种，在7.5 L CelliGen(R)310搅拌式生物反应器中实施片状载体篮式贴壁培养和全悬浮批式及流加培养，同时进行转瓶平行试验，比较不同培养过程的生产效率，建立一套稳定高效的sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白的制备工艺，为进一步优化重组CHO-S细胞培养过程和sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白迈向产业化奠定基础。利用转瓶初步探索人前列腺癌PC-3细胞微载体培养技术，为生物反应器微载体培养PC-3细胞以及基于PC-3细胞培养的肿瘤疫苗中试生产提供支持。<br>　　方法：<br>　　1、筛选细胞悬浮培养无血清培养基:选择本实验室现有的几种无血清培养基包括化学成分限定培养基LK021、化学成分限定培养基CD-CHO、B001，以含8％NBCS的DMEM/F12培养基作为对照培养CHO-S细胞，通过细胞计数及蛋白点杂交检测最终蛋白表达量，选出最适合sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白高效表达制备的无血清培养基。<br>　　2、利用B001无血清培养基驯化重组CHO-S工程细胞株，使其适应全悬浮培养;悬浮驯化运用直接适应法，将处在对数生长期的贴壁生长重组CHO-S细胞消化后，直接换成无血清培养基制成单细胞悬液，转至试剂瓶于摇床中悬浮培养。<br>　　3、考察重组CHO-S细胞培养中丁酸钠的添加浓度:将重组CHO-S细胞以3×105 cells/mL的密度接种于12孔板中，24h后换成含不同浓度丁酸钠的新鲜培养基，每日细胞计数，点杂交半定量表达水平。<br>　　4、7.5 L CelliGen(R)310搅拌式生物反应器中实施片状载体篮式贴壁培养和全悬浮批式及流加培养，同时进行转瓶平行试验。<br>　　5、细胞的生长及代谢检测:每24h取样，台盼蓝拒染法计数活细胞，试剂盒监测营养及代谢产物浓度。<br>　　6、sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白的半定量:使用抗人TNFRⅡ单抗进行蛋白点杂交检测目标蛋白表达水平。<br>　　7、收获重组CHO-S细胞培养上清，离心过滤后经Pellicon切向流超滤系统进行初步浓缩。<br>　　8、ProteinA亲和层析柱(Bio-Rad)分离sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白。<br>　　9、MTT法体外检测sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白对抗TNFα杀伤L929细胞的生物学功能。<br>　　10、Cytodex3微载体的预处理:称取适量Cytodex3微载体，经PBS水合、洗涤后，高压灭菌;使用前用培养基润洗一次，再用新鲜培养基平衡过夜。<br>　　11、玻璃容器的硅化:利用SigmacoteTM(Sigma ChemicalCo.)硅化液按标准操作步骤进行硅化处理，防止Cytodex3粘附。<br>　　12、PC-3细胞微载体培养:取对数生长期的贴壁培养细胞，消化后制成单细胞悬液，以3×105cells/mL终体积的密度、2/3终培养体积接种于转瓶，初期低速旋转后以适当速度连续旋转培养，每24h取样细胞计数及代谢物检测。<br>　　13、微载体培养细胞计数:取1mL微载体悬液，800rpm离心3min，弃上清，加入1mL含0.1％(w/v)结晶紫染色液于37℃温育1h，血球计数板计数细胞核。<br>　　结果：<br>　　1、不同无血清培养基条件下的细胞生长情况有差异，B001培养的细胞其活率基本保持恒定，蛋白表达量最高，在30ug/mL-40ug/mL之间，选定B001作为sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白制备的无血清培养基。<br>　　2、通过为期五天的连续培养，发现丁酸钠明显抑制细胞的生长，添加2mM丁酸钠时，最高细胞数较对照组下降了31％;然而蛋白点杂交检测结果显示丁酸钠对重组蛋白的表达具有促进作用，且2mM的丁酸钠处理使CHO-S细胞获得最高表达量;综合考虑，选择在细胞培养液中添加2mM的丁酸钠，以使细胞高效表达。<br>　　3、重组CHO-S细胞生物反应器全悬浮培养的最高目标蛋白表达量在40mg/L以上，与片状载体篮式贴壁培养和转瓶悬浮培养相比分别提高了3倍和1倍;<br>　　4、Pellicon切向流超滤系统对sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白的浓缩效果佳，回收效率达到96.4％。<br>　　5、sTNFRⅡ-gAD-Fc融合蛋白具备拮抗TNFα杀伤L9

关键词： 植物组织培养   动物细胞培养   碳源   蔗糖   葡萄糖  

摘要： 植物组织培养和动物细胞培养中的碳源比较,植物组织培养使用蔗糖,而动物细胞培养使用葡萄糖。