关键词： CHO cells   design of experiment   medium optimization   microplate   oxygen uptake rate  

摘要： A new approach using microtiter plate cultivation with on-line measurement of dissolved oxygen (DO) was applied for medium optimization of mammalian cell culture. Applying dynamic liquid phase balance, oxygen uptake rates were calculated from the DO level and used as an indicator for culture viability. The developed method was successfully applied to optimization of the concentration of glucose, glutamine and inorganic salts for cultivation of a Chinese Hamster Ovary (CHO) cell line. Using 2(3) full factorial central composite design, the optimum medium composition could be identified in one single run. The concentration of inorganic salts had a significant influence on cultivation. The developed method exhibits high potential to improve procedures of medium optimization for animal cell cultivation by allowing the investigation of large sets of potentially important variables in short time and with reduced effort.

关键词： 动物细胞培养   胶原蛋白   膜   改性   载体  

摘要： 动物细胞培养是细胞工程中的重要组成部分,广泛用于单克隆抗体、疫苗、 重组蛋白等生物药物的生产,具有广阔的发展前景和市场潜力。开发适合动物细 胞培养的载体及其相应反应器,是目前动物细胞培养工程中的重要内容之一。胶 原蛋白是一种天然蛋白,具有良好的生物相容性和理化稳定性,在医药、食品等 领域中有着广泛的应用。 本实验以天然胶原蛋白为原料,采用铬、甲醛、戊二醛改性试剂以及铬-戊 二醛、铝-植物单宁复合改性试剂对其进行化学改性处理,继之以湿热灭菌处理 改善胶原蛋白理化性质,特别是胶原蛋白的收缩温度和膜通透性,制备动物细胞 培养载体。然后,在不同载体上培养 CHO 细胞,通过载体的贴壁实验、细胞葡 萄糖代谢速率以及目的蛋白——促红细胞生长素(Erythropoietin, EPO)浓度对 不同培养载体的生物相容性进行评价;对培养过程中细胞代谢的主要参数——葡 萄糖代谢速率以及 EPO 浓度进行监测,通过这两个参数的变化对细胞的生长周 期及培养周期进行预测。 总结上述实验结果,并进行分析可得出如下结论: 1. 戊二醛改性胶原蛋白经热处理以后基本保持了原有性质,同时表面性状得到 改善,更重要的是再经过湿热灭菌处理,其性状保持稳定,不发生变化,其上述 性质使其可以用于动物细胞培养载体的制备。 2. 戊二醛改性胶原蛋白膜的通透性最好,对 BSA 为 2.47 mg·cm-2·h-1,对溶 菌酶为 7.26 mg·cm-2·h-1,远高于天然胶原蛋白膜及其他改性剂改性膜对两种蛋 白的通透性。 3. CHO 细胞在胶原蛋白载体上进行贴壁,3 小时内完成贴壁过程,之后延长 贴壁培养时间对贴壁效果没有更大的影响,说明细胞在胶原蛋白载体上的贴壁比 较牢固,不易从载体上脱落。 4. CHO 细胞在胶原蛋白膜载体上培养时,葡萄糖的代谢速率最高时达到 14.2 mmol?ml-1?h-1,培养 10 天后 EPO 浓度达到 282 U/ml,相对于 C-DISK 培养细胞 葡萄糖的消耗速率提高 16%,EPO 表达量提高近 30 %;相对于 A-DISK 葡萄糖 的消耗速率提高了 13%,EPO 表达量提高近 18 %。 5. CHO 细胞培养过程中,不同的葡萄糖代谢速率,反映细胞的代谢水平和目 I

关键词： 动物  

ISBN: (纸本)7030135229

关键词： 动物  

ISBN: (纸本)7502554041

摘要： 本书全面系统地介绍了动物细胞培养技术的最新理论和应用。主要内容包括：动物细胞培养的基本过程和放大技术，动物细胞培养在单克隆抗体制备、疫苗生产、基因重组蛋白药物生产、组织工程、SARS研究中的应用，外源基因在动物细胞中的表达与产物纯化，树突状细胞的制备技术。

关键词： 生物反应器   动物细胞   组织工程   细胞培养  

摘要： 动物细胞大量培养是生产生物制品的重要途径 ,它用到的关键设备是生物反应器。根据培养细胞、培养载体、培养液混合方式的不同 ,生物反应器主要有搅拌式、气升式、中空纤维式、回转式等 ,其中搅拌式规模最大。回转式是NASA于 2 0世纪 90年代中期开发的一种新型生物反应器 ,被誉为空间生物反应器 ,可用于组织工程研究。与生物反应器配套的技术主要有灌注、微载体、多孔微球、转入抗凋亡基因等 ,可以有效地提高细胞密度 ,增加生物制品产量 ,提高质量。今后生物反应器研制主要朝两个方向发展 :一是 ,以高密度培养动物细胞生产蛋白质药物为目的 ,二是以三维培养动物细胞 (主要是人类细胞 )再生组织或器官为目的。

关键词： 动物   细胞培养   微生物污染   检测   细菌污染   真菌污染   支原体污染  

摘要： 动物细胞培养体系造成污染的微生物主要是细菌、真菌、支原体等.判断所培养细胞是否被微生物污染,可以通过以下方法进行检测.

关键词： 哺乳动物   细胞培养液   净化   蛋白质药物  

关键词： Biotechnology  

摘要： A very simple off-line respirometer was developed to measure oxygen consumption rates of low respiring and shear-sensitive cell suspensions. The respirometer is composed of a 10 mL glass syringe in which the plunger was substituted with a. polarographic dissolved oxygen probe. Mechanical agitation is provided by means of a,magnetic stirring bar inside the measuring chamber and a stir plate placed bellow the respirometer. Abiotic oxygen fluxes occurring in the measurement chamber such as oxygen diffusion and probe oxygen consumption were investigated. The apparent oxygen uptake rate was then corrected for abiotic oxygen fluxes, leading to accurate measurements of respiration rates ranging from 0.5 to 25.0 mM.h(-1). Additionally, the effect of the stirring bar shape and of the test length on the integrity of plant (Eschschzoltzia californica) and animal (NS0) cells was evaluated. Animal cells showed a higher resistance to mechanical stirring inside the respirometer compared to plant cells (0% of broken cells and 78.1% respectively for a polygonal stirring bar and a 15 min test). For plant cells, cell damage inside the measurement chamber was reduced by optimizing the stirring bar shape and reducing the test length to 5 min or less. This very simple design was shown to provide reliable and low-cost quantification of the oxygen uptake rate of plant and animal cells and can be use even for more demanding measurements such as oxygen affinity studies.

关键词： 研究进展   动物细胞   动物细胞培养   生物反应器  

摘要： 介绍了搅拌式生物反应器、非搅拌式生物反应器、粘性泵生物反应器、膜式旋转细胞培养器、旋转式细胞 /组织三维培养器以及脉冲式生物反应器 ,其中有新型的 ,也有改进传统型的。

关键词： 固定化   动物细胞培养   吸附   微载体   包埋   中空纤维   微囊化  

摘要： 介绍了固定化动物细胞培养过程中主要的技术及其进展 ,包括吸附、包埋、中空纤维、微囊化等。