关键词： 免疫抑制药   药物基因组学   基因多态性   CYP   ABCB1  

摘要： 免疫抑制药对预防急性排斥反应是卓有成效的,但是不同患者的临床用药有着很大的药动学和药效学差异。遗传变异对人与人之间药物处置、药效以及毒性差异的影响是近年来该领域研究的重点。本文系统地地概述了现阶段已用于临床或处于临床研究阶段的免疫抑制剂与人体相关基因多态性的关系,包括与免疫抑制药药物药动学和药效学相关的酶的基因多态性、供体基因多态性、药物作用靶位基因多态性。

关键词： 调节性T细胞   细胞因子   口腔扁平苔藓   免疫抑制剂   羟氯喹   强的松  

摘要： 研究目的：观察口腔扁平苔藓(oral lichen planus, OLP)患者外周血调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)和相关因子的变化,并比较OLP患者经羟氯喹(hydro xychloroquine)或强的松(prednisone)治疗前后外周血Treg细胞水平的改变,为探讨OLP发病机制及免疫抑制治疗提供实验依据。研究方法：1.应用流式细胞技术检测OLP患者外周血中Treg细胞的变化。2.应用qPCR检测OLP患者外周血单个核细胞中Treg相关基因Foxp3、 TGF-β1、IL-2、IL-10的表达,应用ELISA检测OLP患者血清中Treg相关细胞因子TGF-β1、IL-2、IL-10的表达。3.应用流式细胞技术检测OLP患者羟氯喹／强的松治疗后外周血中Treg细胞的变化,初步探讨OLP免疫治疗后Treg细胞的改变。研究结果：***患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例显著高于正常对照组,两组间具有统计学差异(P<0.001)。***患者外周血单个核细胞中Foxp3、TGF-β1和IL-10的表达显著性的高于正常对照组,具有统计学差异(P<0.05),IL-2无明显差异(P>0.05)。***患者血清中TGF-β1、IL-10的表达较正常对照组升高,具有统计学差异(P<0.05),IL-2未见明显改变(P>0.05)。***患者经过羟氯喹治疗后,其外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的比例较治疗前显著降低(P<0.01);而强的松治疗组则未看到相关现象(P>0.05)。研究结论：***细胞的数量在OLP外周血中显著增加,提示Treg细胞改变参与了OLP的发病。***患者外周血中Treg细胞相关的因子发生了改变,进一步提示Treg细胞及其因子与OLP相关。3.使用羟氯喹治疗OLP患者,其外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T胞的比例相对于治疗前,显著性降低,提示Treg细胞在羟氯喹治疗OLP过程中发生了改变,Treg细胞调控是羟氯喹治疗OLP发挥免疫抑制作用的机制之一。而经过强的松治疗的OLP患者中未发现Treg细胞的改变。

关键词： 免疫抑制药物   红外光谱   圆二色谱   钙调神经磷酸酶   结构表征  

摘要： 光波谱技术在当当前生命科学研究领域中扮演重要角色。X-射线晶体衍射和多维核磁共振(NMR)是研究蛋白质等生物大分子结构的重要工具，荧光、紫外、红外、拉曼及圆二色等光谱技术则在蛋白质的构象及功能研究中因其诸多优点而不可或缺。本研究采用这些光谱技术研究免疫抑制药物对相关蛋白的构象调控机理。　　器官移植是临床治疗器官功能衰竭的有效治疗手段，免疫抑制剂的成功应用是器官移植技术发展的有力保障。生物制剂类免疫抑制药物棉子酚、环孢素和他克莫司等可以通过与靶目标蛋白钙调神经磷酸酶结合而有效地阻断T细胞的增殖。这些药物主要通过T细胞受体(T cell receptor, TCR)信号转导通路作用于活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T-cells，NFAT)信号途径，抑制钙调神经磷酸酶的活性，阻止NFAT的去磷酸化，抑制白细胞介素2(Interleukin2，IL2)及其他细胞因子基因的转录，从而发挥免疫抑制效应。钙调神经磷酸酶（Calcineurin, CN）是迄今发现的唯一受Ca+-钙调蛋白（Calmodulin, CaM）调节的丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶，是TCR信号转导通路的关键酶。本论文以各种谱学技术为研究手段，研究了棉籽酚、环孢素和他克莫司等常用免疫抑制药物对CN及其相关蛋白的构象调控机理。此外，我们用这些谱学技术对日常生活中常用蛋白如明胶、胶原蛋白等进行了结构表征。具体研究内容及研究成果包括:　　一、利用红外光谱和圆二色谱等谱学技术研究了Ca2+/CaM调控CN的机理。CN是由催化亚基和调节亚基构成的异二聚体结构，位于活性中心自抑制区域对于CN的活性调控具有重要意义。研究发现，CN的调节区域大部分是无规则卷曲，但是这部分序列至少具有一定的结构。调节结构域在晶体结构信息中的缺失可能不是因为这段区域不具有结构，而是这段序列结构变化太快。Ca2+/CaM与CN结合引起CN的构象发生一系列的变化，使CN二级结构α螺旋显著增加，结构变得更加有序，CN折叠成更紧密，更疏水的构象，通过空间阻碍阻止自抑制区域与活性中心作用，从而被激活。　　二、通过荧光淬灭研究棉子酚抑制CN的作用机理。棉籽酚可以与CN结合，非竞争性，可逆的抑制CN的磷酸酶活性。研究结果表明Ca2+和CaM可以诱导CN构象发生变化，使其活性部位的暴露程度增加，从而激活其去磷酸化作用。在Ca2+存在条件下，随着棉子酚浓度的增加，钙调神经磷酸酶活性部位的暴露程度减小，其去磷酸化作用显著降低，从而达到免疫抑制的作用。加入CaM后，棉子酚浓度的增加引起的荧光淬灭强度变化较小，CN与CaM结合后变得更加稳定，棉子酚对CN磷酸酶活性的抑制可能与CaM的结合无关，是通过非依赖CaM的方式进行的。　　三、日常生活中常见的蛋白类商品如食用明胶、胶原蛋白等，其二级结构因来源及加工工艺不同而有区别，这或影响其功能。我们用红外、圆二色等谱学技术对不同来源食用明胶和胶原蛋白的二级结构进行了系统测定，结果表明不同来源的明胶及胶原蛋白的二级结构具有明显区别。

关键词： 免疫抑制剂   细胞培养   体外筛选   T淋巴细胞   模型  

摘要： 【目的】建立一种可靠的体外筛选模型评价药物的免疫抑制活性。【方法】在以二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导小鼠耳廓接触性超敏反应(contact hypersensitivity,CHS)模型的基础上,体外培养模型小鼠脾脏T细胞,首先分析细胞增殖活性,进而采用RT-PCR分析核因子IFN-γ、IL-4、T-bet、GATA-3的mRNA表达,最后通过三种临床上常用的免疫抑制药物进行验证。【结果】模型小鼠T淋巴细胞在体外能维持一定时程的高反应性,IFN-γ/IL-4与T-bet/GATA-3比值均明显增加,T细胞向Th1方向分化偏移,同时,环孢素、地塞米松、霉酚酸酯均能显著抑制T细胞的体外增殖。【结论】本研究初步建立了一种简单的可用于筛选免疫制剂的体外细胞模型。

关键词： 免疫抑制药物   器官移植   骨髓干细胞移植   移植心脏   免疫耐受   免疫系统   长期生存   社会医疗  

摘要： 通过骨髓干细胞移植诱导心脏移植后免疫耐受，可以实现移植心脏被患者免疫系统“认可”，仅需少量甚至不需要服用免疫抑制药物，从而实现移植患者的长期生存，并大大减少患者家庭和社会医疗的负担。

关键词： untargeted metabolomics   Saccharomyces cerevisiae   yeast   calcium   calcineurin   FK506   Cyclosporin A   stress response  

摘要： Previous studies have shown that calcium stressed Saccharomyces cerevisiae, challenged with immunosuppressant drugs FK506 and Cyclosporin A, responds with comprehensive gene expression changes and attenuation of the generalized calcium stress response. Here, we describe a global metabolomics workflow for investigating the utility of tracking corresponding phenotypic changes. This was achieved by efficiently analyzing relative abundance differences between intracellular metabolite pools from wild-type and calcium stressed cultures, with and without prior immunosuppressant drugs exposure. We used pathway database content from WikiPathways and YeastCyc to facilitate the projection of our metabolomics profiling results onto biological pathways. A key challenge was to increase the coverage of the detected metabolites. This was achieved by applying both reverse phase (RP) and aqueous normal phase (ANP) chromatographic separations, as well as electrospray ionization (ESI) and atmospheric pressure chemical ionization (APCI) sources for detection in both ion polarities. Unsupervised principle component analysis (PCA) and ANOVA results revealed differentiation between wild-type controls, calcium stressed and immunosuppressant/calcium challenged cells. Untargeted data mining resulted in 247 differentially expressed, annotated metabolites, across at least one pair of conditions. A separate, targeted data mining strategy identified 187 differential, annotated metabolites. All annotated metabolites were subsequently mapped onto curated pathways from YeastCyc and WikiPathways for interactive pathway analysis and visualization. Dozens of pathways showed differential responses to stress conditions based on one or more matches to the list of annotated metabolites or to metabolites that had been identified further by MS/MS. The purine salvage, pantothenate and sulfur amino acid pathways were flagged as being enriched, which is consistent with previously published literature for transc

摘要： Kidney transplantation is the preferred treatment for patients with ESRD. It improves the quality of life in recipients, increases patient survival, and is also substantially less costly than maintenance dialysis. Long-term transplant success requires immunosuppressant drug therapy for the life of the allograft. Under current law, Medicare coverage for most recipients (except for those recipients over 65 years of age or with nonkidney-related disabilities) lasts only 3 years, leaving many recipients unable to afford these medications. Lack of drug therapy often leads to allograft rejection, resulting in premature graft failure, return to dialysis, or death. This article reviews the current policy for Medicare immunosuppressive drug coverage and analyzes the potential impact of pending legislative proposals H.R. 2969 and S. 1454 and the Patient Protection and Affordable Care Act.

关键词： Solid organ transplantation   renal transplantation   immunosuppressive drugs  

摘要： In recent years solid organ transplantation has been rapidly developed as a therapeutic intervention that is life-saving and greatly contributes to a better quality of life in organ recipients. The rapid development has been made possible because of a drastic expansion in the immunosuppressive repertoire. Unfortunately, the side effects of these drugs can be severe, which is one of the reasons that life expectancy of transplant patients still significantly falls short of that of the general population. In this review manuscript we will discuss current and future immunosuppressive strategies that are employed in solid organ transplantation. Expanding our understanding of the human immune system will hopefully provide us with newer, smarter drugs that promote immunotolerance without the side effects observed today.

关键词： 药物基因组学   肝移植   免疫抑制药物   研究进展  

摘要： 移植排斥反应是肝移植术后最主要的危险因素,除非给予免疫抑制剂。不同个体之间免疫抑制剂的代谢是存在很大差异,而存在这种差异的原因很可能以药物代谢相关基因有很大关系,所以研究免疫抑制剂的药物基因组学对于提高肝移植术后药物疗效及减少不良反应的发生都有很重要的意义,同时这种方法也有助于免疫抑制剂的个体化用药。

关键词： 免疫抑制药物   器官移植   心脏病   骨髓干细胞移植   移植免疫耐受   髓腔内骨髓移植   心衰患者   心力衰竭  

摘要： 心力衰竭是冠心病、风心病、心肌病等各种心脏病的终末阶段，死亡率高达50％。据我国50家医院的调查，目前住院患者中约有2000万心衰患者。通过骨髓干细胞移植诱导心脏移植后免疫耐受，可以实现移植心脏被患者免疫系统“认可”，仅需少量甚至不需要服用免疫抑制药物，从而实现移植患者的长期生存，并大大减少患者家庭和社会医疗的负担。目前，该团队已成功完成5例骨髓腔内骨髓移植诱导心脏移植免疫耐受病例。