关键词： 调节性T细胞   细胞因子   口腔扁平苔藓   免疫抑制剂   羟氯喹   强的松  

摘要： 研究目的：观察口腔扁平苔藓(oral lichen planus, OLP)患者外周血调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)和相关因子的变化,并比较OLP患者经羟氯喹(hydro xychloroquine)或强的松(prednisone)治疗前后外周血Treg细胞水平的改变,为探讨OLP发病机制及免疫抑制治疗提供实验依据。研究方法：1.应用流式细胞技术检测OLP患者外周血中Treg细胞的变化。2.应用qPCR检测OLP患者外周血单个核细胞中Treg相关基因Foxp3、 TGF-β1、IL-2、IL-10的表达,应用ELISA检测OLP患者血清中Treg相关细胞因子TGF-β1、IL-2、IL-10的表达。3.应用流式细胞技术检测OLP患者羟氯喹／强的松治疗后外周血中Treg细胞的变化,初步探讨OLP免疫治疗后Treg细胞的改变。研究结果：***患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例显著高于正常对照组,两组间具有统计学差异(P<0.001)。***患者外周血单个核细胞中Foxp3、TGF-β1和IL-10的表达显著性的高于正常对照组,具有统计学差异(P<0.05),IL-2无明显差异(P>0.05)。***患者血清中TGF-β1、IL-10的表达较正常对照组升高,具有统计学差异(P<0.05),IL-2未见明显改变(P>0.05)。***患者经过羟氯喹治疗后,其外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的比例较治疗前显著降低(P<0.01)；而强的松治疗组则未看到相关现象(P>0.05)。研究结论：***细胞的数量在OLP外周血中显著增加,提示Treg细胞改变参与了OLP的发病。***患者外周血中Treg细胞相关的因子发生了改变,进一步提示Treg细胞及其因子与OLP相关。3.使用羟氯喹治疗OLP患者,其外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T胞的比例相对于治疗前,显著性降低,提示Treg细胞在羟氯喹治疗OLP过程中发生了改变,Treg细胞调控是羟氯喹治疗OLP发挥免疫抑制作用的机制之一。而经过强的松治疗的OLP患者中未发现Treg细胞的改变。

关键词： 免疫抑制药物   红外光谱   圆二色谱   钙调神经磷酸酶   结构表征  

摘要： 光波谱技术在当当前生命科学研究领域中扮演重要角色。X-射线晶体衍射和多维核磁共振(NMR)是研究蛋白质等生物大分子结构的重要工具，荧光、紫外、红外、拉曼及圆二色等光谱技术则在蛋白质的构象及功能研究中因其诸多优点而不可或缺。本研究采用这些光谱技术研究免疫抑制药物对相关蛋白的构象调控机理。　　器官移植是临床治疗器官功能衰竭的有效治疗手段，免疫抑制剂的成功应用是器官移植技术发展的有力保障。生物制剂类免疫抑制药物棉子酚、环孢素和他克莫司等可以通过与靶目标蛋白钙调神经磷酸酶结合而有效地阻断T细胞的增殖。这些药物主要通过T细胞受体(T cell receptor, TCR)信号转导通路作用于活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated T-cells，NFAT)信号途径，抑制钙调神经磷酸酶的活性，阻止NFAT的去磷酸化，抑制白细胞介素2(Interleukin2，IL2)及其他细胞因子基因的转录，从而发挥免疫抑制效应。钙调神经磷酸酶（Calcineurin, CN）是迄今发现的唯一受Ca+-钙调蛋白（Calmodulin, CaM）调节的丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶，是TCR信号转导通路的关键酶。本论文以各种谱学技术为研究手段，研究了棉籽酚、环孢素和他克莫司等常用免疫抑制药物对CN及其相关蛋白的构象调控机理。此外，我们用这些谱学技术对日常生活中常用蛋白如明胶、胶原蛋白等进行了结构表征。具体研究内容及研究成果包括:　　一、利用红外光谱和圆二色谱等谱学技术研究了Ca2+/CaM调控CN的机理。CN是由催化亚基和调节亚基构成的异二聚体结构，位于活性中心自抑制区域对于CN的活性调控具有重要意义。研究发现，CN的调节区域大部分是无规则卷曲，但是这部分序列至少具有一定的结构。调节结构域在晶体结构信息中的缺失可能不是因为这段区域不具有结构，而是这段序列结构变化太快。Ca2+/CaM与CN结合引起CN的构象发生一系列的变化，使CN二级结构α螺旋显著增加，结构变得更加有序，CN折叠成更紧密，更疏水的构象，通过空间阻碍阻止自抑制区域与活性中心作用，从而被激活。　　二、通过荧光淬灭研究棉子酚抑制CN的作用机理。棉籽酚可以与CN结合，非竞争性，可逆的抑制CN的磷酸酶活性。研究结果表明Ca2+和CaM可以诱导CN构象发生变化，使其活性部位的暴露程度增加，从而激活其去磷酸化作用。在Ca2+存在条件下，随着棉子酚浓度的增加，钙调神经磷酸酶活性部位的暴露程度减小，其去磷酸化作用显著降低，从而达到免疫抑制的作用。加入CaM后，棉子酚浓度的增加引起的荧光淬灭强度变化较小，CN与CaM结合后变得更加稳定，棉子酚对CN磷酸酶活性的抑制可能与CaM的结合无关，是通过非依赖CaM的方式进行的。　　三、日常生活中常见的蛋白类商品如食用明胶、胶原蛋白等，其二级结构因来源及加工工艺不同而有区别，这或影响其功能。我们用红外、圆二色等谱学技术对不同来源食用明胶和胶原蛋白的二级结构进行了系统测定，结果表明不同来源的明胶及胶原蛋白的二级结构具有明显区别。

关键词： 免疫抑制剂   细胞培养   体外筛选   T淋巴细胞   模型  

摘要： 【目的】建立一种可靠的体外筛选模型评价药物的免疫抑制活性。【方法】在以二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB)诱导小鼠耳廓接触性超敏反应(contact hypersensitivity,CHS)模型的基础上,体外培养模型小鼠脾脏T细胞,首先分析细胞增殖活性,进而采用RT-PCR分析核因子IFN-γ、IL-4、T-bet、GATA-3的mRNA表达,最后通过三种临床上常用的免疫抑制药物进行验证。【结果】模型小鼠T淋巴细胞在体外能维持一定时程的高反应性,IFN-γ/IL-4与T-bet/GATA-3比值均明显增加,T细胞向Th1方向分化偏移,同时,环孢素、地塞米松、霉酚酸酯均能显著抑制T细胞的体外增殖。【结论】本研究初步建立了一种简单的可用于筛选免疫制剂的体外细胞模型。

关键词： 免疫抑制药物   器官移植   骨髓干细胞移植   移植心脏   免疫耐受   免疫系统   长期生存   社会医疗  

摘要： 通过骨髓干细胞移植诱导心脏移植后免疫耐受，可以实现移植心脏被患者免疫系统“认可”，仅需少量甚至不需要服用免疫抑制药物，从而实现移植患者的长期生存，并大大减少患者家庭和社会医疗的负担。

关键词： 免疫抑制药物   器官移植   心脏病   骨髓干细胞移植   移植免疫耐受   髓腔内骨髓移植   心衰患者   心力衰竭  

摘要： 心力衰竭是冠心病、风心病、心肌病等各种心脏病的终末阶段，死亡率高达50％。据我国50家医院的调查，目前住院患者中约有2000万心衰患者。通过骨髓干细胞移植诱导心脏移植后免疫耐受，可以实现移植心脏被患者免疫系统“认可”，仅需少量甚至不需要服用免疫抑制药物，从而实现移植患者的长期生存，并大大减少患者家庭和社会医疗的负担。目前，该团队已成功完成5例骨髓腔内骨髓移植诱导心脏移植免疫耐受病例。

关键词： 药物基因组学   肝移植   免疫抑制药物   研究进展  

摘要： 移植排斥反应是肝移植术后最主要的危险因素,除非给予免疫抑制剂。不同个体之间免疫抑制剂的代谢是存在很大差异,而存在这种差异的原因很可能以药物代谢相关基因有很大关系,所以研究免疫抑制剂的药物基因组学对于提高肝移植术后药物疗效及减少不良反应的发生都有很重要的意义,同时这种方法也有助于免疫抑制剂的个体化用药。

关键词： 器官移植   免疫抑制剂   治疗性药物监测   药物基因组学  

摘要： 器官移植为保证移植器官在受者体内生存，需长期使用免疫抑制剂。免疫抑制药物在体内代谢的个体差异大，其血药浓度高低与肝、肾毒性损害和排斥反应密切相关。药物代谢转运蛋白（MDR）和药物代谢细胞色素P450同工酶（CYP450）的基因多态性可导致其编码的蛋白表达或活性呈现多态性，不同个体间对某种特定药物代谢的差异是不同个体编码基因的遗传多态性相互作用的结果，这种相互作用导致药物代谢分布以及药物靶标作用的较大差异。在常规临床血药浓度监测基础上，通过研究药物疗效中的遗传变异，分析个体遗传基因组成在决定药物疗效和代谢毒性的特征，检测个体药物反应遗传基因型和表型或基因多态性，预测个体对药物的治疗剂量已开始逐步应用于药物治疗的临床研究，这是临床检验工作者将面临的新任务与挑战。

关键词： 免疫抑制   肝移植   应用   不良反应   撤除   器官移植  

摘要： 背景:现今用于肝移植的抑制免疫排斥反应的药物种类繁多,新型药物也在不断开发中,免疫抑制治疗方案亦多种多样,尚无统一标准。目的:总结和评价肝移植后临床上常用的各型免疫抑制药物并介绍近年来关于免疫抑制治疗方案的热点问题。方法:由第一作者用计算机检索中国全文期刊数据库(CNKI:2000/2011)和PubMed(2000/2011)数据库,检索词分别为"肝移植、免疫抑制、应用、不良反应、撤除"和"Liver transplantation,Immunosuppression,Application,Side-effect,WithdrawaI"。从肝移植后免疫抑制药物的应用现状与进展、免疫抑制方案的选择、激素撤除与免疫抑制剂撤除等方面进行总结。共检索到158篇文献,按纳入和排除标准进行筛选,共纳入45篇。结果与结论:结果表明,目前临床用于肝移植的各种免疫抑制药物都存在着较多不良反应;各种新型、高效、低毒的免疫抑制药物仍在不断研发中,具有广阔前景。激素撤除与免疫抑制剂撤除等新治疗方案的尝试,在一定条件下取得了不错的临床效果,其长期的疗效和安全性有待证实。合理选择和使用免疫抑制药物、开发新型药物、探索新的免疫抑制治疗方案,使肝移植受者的生活质量和生存率得到不断改善。

关键词： 血液滤过   紫癜性肾炎   免疫抑制剂   白细胞介素6   白细胞介素18   肿瘤坏死因子α  

摘要： 目的探讨血液滤过联合药物治疗重症紫癜性肾炎的有效性。方法将66例重症紫癜性肾炎患者按随机数字表法分为治疗组和对照组,每组33例。治疗组接受血液滤过联合常规泼尼松和环磷酰胺治疗,对照组接受常规泼尼松和环磷酰胺治疗,疗程均为1个月。观察两组患者治疗前、后的24 h尿蛋白定量、肾功能、超敏C反应蛋白、白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α水平的变化。结果基线时两组患者在年龄、性别、病程、24 h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮、白细胞介素6、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α水平比较差异无统计学意义(P>0.05);经治疗后,治疗组患者的白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、超敏C反应蛋白、肌酐、尿素氮水平与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组患者治疗后肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量与治疗前比较差异也有统计学意义(P<0.05),而白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、超敏C反应蛋白指标与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血液滤过联合泼尼松、环磷酰胺治疗能有效降低重症紫癜性肾炎患者体内的炎症因子(白细胞介素6、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α)水平,降低蛋白尿和改善肾功能。

关键词： 免疫抑制剂   肾移植   肝移植   排斥反应   环孢素A   吗替麦考酚酯   他克莫司  

摘要： 背景:器官移植患者需要终生伴随免疫抑制剂,因此合理应用免疫抑制剂是器官移植成功的关键所在。目的:对各类代表药物在器官移植中的应用作简要分析,拟为器官移植患者选择合适的免疫抑制剂。方法:由第一作者检索1999-01/2011-06 PubMed数据库(http://***/PubMed)和万方数据库(http://***)。英文检索词为"immunosuppressive drug;reject reaction;cyclosporine A;tacrolimus(FK506)",中文检索词为"免疫抑制剂,肾移植,肝移植,排斥反应"。检索文献量总计105篇,选择不同种类的免疫抑制药物在不同器官移植领域应用的特点及临床效果分析,排除陈旧及重复实验文章,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志的文章,最终纳入18篇符合标准的文献。结果与结论:常见免疫抑制药分类:肾上腺皮质激素、代谢拮抗药、T淋巴细胞抑制药。然而每一种免疫抑制剂在发挥免疫抑制作用时都会伴有一定毒副反应,应尽量避免不良反应发生。如何利用免疫抑制药之间的协同作用,发挥最佳疗效是临床需进一步关注和研究的重点,应严密监测患者血药浓度,做到个体化用药,尽可能降低毒副反应发生率。