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关键词： 双创   生物技术   产学研赛创   一体化人才培养  

摘要： 硕士研究生阶段是生物技术专业培养与提升研究生创新、创业等素质的关键阶段。产学研赛创一体化人才培养模式有助于培养研究生理论和实践能力、研究与创新能力，以及整合赛事和创业经验。目前部分高校生物技术专业硕士研究生培养在人才培养模式、校外实践基地、高校双创项目、教育评价体系等方面仍存在问题。为此，高校可通过以下方式构建产学研赛创一体化人才培养模式：结合双创项目，打造“1+1+N”平台；链接校外资源，搭建双创工程实践基地；整合校内外资源，助推双创项目孵化培育；构建综合评价体系，全面评估研究生培养质量等实践路径。

关键词： 药物基因组学   高血压   硝苯地平   基因多态性   基因位点   相关性  

摘要： 目的 基于药物基因组学技术，分析服用硝苯地平原发性高血压患者药物相关基因多态性分布情况，评估基因导向使用硝苯地平的应用价值。方法 选取2021年10月至2023年10月收治的485例服用硝苯地平的原发性高血压患者作为研究对象，分析硝苯地平药物相关基因，并进一步分析各基因多态性位点基因型分布情况，比较不同疗效、有无下肢水肿患者各基因多态性位点基因型分布情况，行单因素、多因素Logistic回归分析基因多态性位点与疗效、下肢水肿的关系。结果 细胞色素P450（CYP）3A5*3 A6986、尿素转运型糖蛋白A2抗体（SLC14A2）rs1123617、SLC14A2 rs3745009、CYP3A4 rs2242480、肾上腺素能α1A受体（ADRA1A）rs1048101、肾上腺素能β1受体（ADRB1）c.1165、肾上腺素能β2受体（ADRB2）rs1042713、血管紧张素转换酶（ACE）rs4646994基因多态性均符合Hardy-Weinberg平衡定律，说明样本具有代表性。不同疗效、有无下肢水肿患者CYP3A5*3 A6986、CYP3A4 rs2242480、ADRB1 c.1165、ADRB2 rs1042713、ACE rs4646994位点基因型比较，差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;而SLC14A2 rs1123617、SLC14A2 rs3745009、ADRA1A rs1048101位点基因型比较无统计学差异（P>0.05）。单因素、多因素Logistic回归分析显示，CYP3A5*3 A6986 G>A、CYP3A4 rs2242480 C>T、ADRB1 c.1165 C>G、ADRB2 rs1042713 G>A、ACE rs4646994 I>D与服用硝苯地平原发性高血压患者疗效、下肢水肿显著相关（P<0.01）。结论 服用硝苯地平原发性高血压患者药物相关基因多态性与疗效、下肢水肿密切相关，可为临床医师制订个性化治疗方案提供参考。

关键词： 非天然氨基酸   合成生物学   胺催化   级联转胺   生物催化  

摘要： 利用生物催化剂进行新颖的非生物转化是合成化学的长期目标。人工酶设计可能成为天然酶研究的补充,揭示天然酶的催化机理,实现天然酶尚未实现的作用。人工酶结合了生物催化和化学催化的优点,可以在生物条件下进行选择性转化,具有反应活性高、对映体选择性高、合成更环保、产率高等优点。将非天然催化的化学部分引入蛋白质骨架中构建人工酶是实现非天然生物催化反应的一种有前途的策略。本课题基于前期的研究,在培养基中加入对氨基苯硫酚前体小分子,在o-乙酰丝氨酸转移酶基因(Nt Sat4)和半胱氨酸合成酶基因(Cys M)的共同作用下,生物合成对氨基苯半胱氨酸(pAPhC),通过正交翻译系统将非天然氨基酸pAPhC引入乳酸乳球菌多药耐药性调节因子(LmrR蛋白)的疏水口袋,创建了以pAPhC为催化中心的新型人工酶LmrR＿pAPhC。主要研究内容和结论如下: (1)非天然氨基酸pAPhC的引入。在大肠杆菌内构建三质粒体系,饲喂非天然氨基酸前体底物对氨基苯硫酚,使生物体内合成非天然氨基酸pAPhC,在LmrR蛋白骨架中引入苯胺催化中心,通过高效液相色谱-高分辨质谱联用(HPLC-HRMS)监测到的分子量为15069.0010 Da,表明新型人工酶LmrR＿V15pAPhC的成功构建与表达。 (2)模板反应的筛选及底物谱。围绕模板傅克烷基化反应,筛选14种底物,最优突变体在产量和对映选择性方面都优于野生型,其中最优突变体催化2-甲基吲哚和反式-2-戊烯醛为底物的反应,得到对映体过剩率(ee值)93±0%和98±1%产率。筛查结果表明,带有2位甲基的吲哚作为底物普遍能得到更好的ee值和产率,并且该酶能催化得到双手性中心的产物,展现了非常好的对映选择性。 (3)模板反应的定向进化。通过丙氨酸扫描筛选出10个热点位置,经过三轮的定向进化,得到最优突变体LmrR＿pAPhC＿F93I＿M8R＿A92D(简写为LmrR＿pAPhC＿IRD),该突变体催化傅克烷基化反应能达到ee值93±0%的手性选择性和≥95%的产率。 (4)生物级联转胺体系的建立。筛选了一种磷酸吡哆醛(PLP)依赖型转氨酶(命名为PLP-6)用于将模板反应产物的醛基转化为胺。验证实验证明级联体系能够转化酶催化的傅克烷基化产物,并且能够保持胺催化反应的高ee值(93±0%),产生与药物中间体相关的转胺产物。 (5)LmrR＿pAPhC与LmrR＿pAPhC＿IRD蛋白晶体的解析。通过X射线晶体学分析,解析了LmrR＿pAPhC与LmrR＿pAPhC＿IRD蛋白晶体的结构,其分辨率分别达到2.69(?)和2.79(?)。非天然氨基酸pAPhC在晶体结构中均为单一、明确的构象,进化没有对蛋白的整体结构产生较大影响,但pAPhC苯环在平面上大约有20°的旋转,并且在苯环垂直平面上有5°左右的旋转,疏水空腔缩小,其侧链受Met89、Asn19、Asp92、Ile93残基的包裹。

关键词： 污水处理   固定化微生物   微生物技术  

摘要： 当前我国城市污水处理工作中，微生物固定化技术被逐渐应用，通过对微生物进行有效的固定，不仅能够有效地增强废水处理工作的效率与质量，还能够减少由于环境污染带来的经济损失。基于此，文章结合现阶段固定化微生物技术处理污水研究现状，对该技术相关应用要点进行探析，以提高污水处理工作效果，希望可以为相关工作的开展提供参考。

关键词： 皮刺螨总科   密码子使用偏好   tRNA二级结构   基因重排   系统发育   分歧时间  

摘要： 目的:皮刺螨总科（Dermanyssoidea）是与医学关系较为密切的一类革螨,其分类地位一直存在争议。迄今为止,国内外对皮刺螨总科的研究大都局限于形态学和单基因分子。作为分子系统发育学研究的重要工具——线粒体基因组,目前未广泛运用到皮刺螨总科的研究中。本研究测定并比较分析皮刺螨总科4种革螨的线粒体基因组结构特征和变异情况,结合本课题组和NCBI已测定的皮刺螨总科5科8属11个物种,从密码子使用偏好性、非典型tRNA二级结构、基因重排、系统发育分析和分歧时间估算等方面对该总科进化机制进行全面分析探讨。 方法:本研究用Illumina Hiseq X-Ten和Illumina Novoseq 6000测序平台对皮刺螨总科4种革螨的线粒体基因组进行测定。获得的序列用Mito Z 2.3和Geneious Prime11.0进行组装。利用MITOS2、tRNAscan-SE、ARWEN和Blast对线粒体基因进行查找和注释。使用Codonw、R语言、Python语言、RNAfold、Clustal X、DAMBE、Mega11、IQtree v2.2.0、Mr Bayes v3.2.7和Beast2 v2.6.7等软件对皮刺螨总科的线粒体基因组数据进行分析。采用最大似然法（ML）和贝叶斯法（BI）进行系统发育分析,利用系统发育分析树形进行分歧时间估算。 结果:1.毒刺厉螨、金氏厉螨、纳氏厉螨和拟纳氏厉螨线粒体基因组均具有典型后生动物的37个基因和1个控制区。4种厉螨的线粒体基因组具有较高的AT含量（81.6%、82.7%、81.5%和79.8%）,蛋白编码基因均以ATN为起始密码子,TAA、TAG、T和TA为终止密码子。4种厉螨中,37个基因在J链和N链的分布较恒定,但基因之间存在不同程度的重排。 2.皮刺螨总科15种革螨线粒体蛋白编码基因的密码子偏好使用富含A、T碱基的密码子,亲缘关系越近的革螨其密码子使用模式越相似。皮刺螨总科15种革螨在进化过程中主要受到自然选择的影响。 3.皮刺螨总科物种间线粒体tRNA的平均长度为62.6±0.86 bp。trn S1缺乏DHU臂是典型后生动物的祖征,其余21种tRNA中大多数物种的tRNA保留三叶草式二级结构,且皮刺螨总科tRNA三叶草式二级结构与典型后生动物tRNA二级结构相似。厉螨科厉螨属的3个物种（纳氏厉螨、拟纳氏厉螨、金氏厉螨）、刺厉螨属的3个物种（福建刺厉螨、特氏刺厉螨、毒刺厉螨）、狄斯瓦螨和Coleolaelaps ***的trn C缺乏DHU臂,真厉螨属3个物种的trn R具有较短的接受臂（3对碱基）且trn S2缺乏DHU臂。 4.皮刺螨总科线粒体基因组的重排程度较高,15种革螨有11种重排模式。tRNA和r RNA是皮刺螨总科线粒体基因组中发生重排的高频基因。亲缘关系较近的物种之间具有高度一致的共享衍生基因簇“rrn L-trn V-trn M-rrn S”、“cob-nad2-trn I-trn L1-nad1-trn S2-trn W-trn P-trn Y-trn L2-trn Q”、“trn A-trn R-trn N-trn S1-trn F-trn E”、“trn M-nad2-trn C-trn W”、“nad5-nad4-nad4L”和“trn T-nad6-cob”。 5.系统发育分析和分歧时间估算显示,形态上有微小差异的拟纳氏厉螨与纳氏厉螨,亲缘关系较近,分歧于27.87 Mya（古新纪/Paleocene）。皮刺螨总科中厉螨属（金氏厉螨、纳氏厉螨和拟纳氏厉螨）与刺厉螨属（毒刺厉螨、福建刺厉螨和特氏刺厉螨）形成姊妹群,分歧于57.98 Mya（古新纪/Paleocene）。瓦螨科的狄斯瓦螨的分支位于厉螨科物种内,与厉螨属和刺厉螨属亲缘关系较近,并在85.37 Mya（白垩纪时期/Cretaceous）与刺厉螨属和厉螨属发生分歧。不支持将血革螨科的分类地位降为血革螨亚科,强烈支持血革螨单独成科（血革螨科）,厉螨科和血革螨科形成姊妹群。 结论:本研究的皮刺螨总科线粒体基因组不同于典型的节肢动物线粒体基因组,其线粒体基因组独有特征（密码子使用模式、tRNA基因非典型二级结构和线粒体基因重排模式的多样性）的发现以及对其进化机制的深入探讨可以为皮刺螨总科提供更多可靠的系统发育证据。系统发育分析和分歧时间估算支持拟纳氏厉螨与纳氏厉螨独立成种;瓦螨科的狄斯瓦螨是与厉螨科的刺厉螨属和厉螨属亲缘关系较近表明瓦螨科隶属于厉螨科。刺厉螨属和厉螨属是亲缘关系较近的两个属,根据形态特征将厉螨属中的大型革螨归入刺厉螨属,小型革螨归入厉螨属。血革螨科是皮刺螨总科下的一个独立的科。

摘要： ***抗体是什么？Total SeqTM抗体是在抗体上偶联了一段寡核昔酸序列，偶联后的抗体可以用千单细胞蛋白质和RNA的同时检测，相关的技术称为CITE-Seq或REAP-Seq。Total SeqTM抗体可以无缝对接到现有的单细胞转录组测序工作流程中，包括基千poly（d T）-po ly（A）捕获的平台及1 Ox Geno mies的转录组测序和免疫谱分析[V（D）J测序]平台。

关键词： 蔬菜废弃物液   复合乳酸菌   固定化处理   厌氧发酵   乳酸   萃取  

摘要： 蔬菜废弃物产量大,如不能有效处理,会造成环境污染和资源浪费。目前,处置方法以焚烧、卫生填埋、堆肥、厌氧发酵为主,相对而言,厌氧发酵有明显优势,发酵产生的乳酸,具有较高的价值和广泛的应用前景,可实现蔬菜废弃物的高值化利用。蔬菜废弃物固液分离后,可溶性有机物滞留于液相,为蔬菜废弃物液高效发酵产乳酸创造了条件。本研究以购置的复合乳酸菌为菌源,优化其培养条件,以蔬菜废弃物液为发酵底物,研究了各因素对复合乳酸菌液及固定化复合乳酸菌发酵产乳酸的影响,结合微生物分析阐明其发酵机理。并探究了萃取条件、萃取方法对乳酸萃取率及其纯度的影响,为蔬菜废弃物液高效产乳酸及其分离提供理论依据。具体研究结果如下: (1)复合乳酸菌液的适宜培养条件为接种量1.5%、初始pH 6、温度34℃、培养时间12h,所得菌液的OD600为2.25。培养0h、12h的菌液在门水平上,以厚壁菌门(Firmicutes)为主,0h占95.1%,12h占94.9%;在科水平上,以乳杆菌科(Lactobacillaceae)为主,0h占89.8%,12h占90.3%。在属水平上,培养时间从0h到12h,乳植杆菌属(Lactiplantibacillus)相对丰度上升,增加了41.9%,而乳杆菌属(Lactobacillus)和乳酪杆菌属(Latilactobacillus)相对丰度降低,分别减少了20.6%和24.2%,说明适宜培养条件下,更适合Lactiplantibacillus的生长繁殖,对Lactobacillus和Latilactobacillus具有一定的抑制作用。 (2)复合乳酸菌液在发酵温度35℃、发酵时间16h时,通过响应面优化得到发酵产乳酸的最佳条件为:接种量12%、初始pH 6、C/N 19,在此条件下得到的最大乳酸产量为11.76g/L,转化率为53.26%。复合乳酸菌液、蔬菜废弃物液、发酵液(0h、16h、24h)在门水平上均以Firmicutes为主,分别为94.87%、89.87%、94.90%、94.45%、94.47%;在科水平上均以Lactobacillaceae为主,分别为89.84%、75.16%、75.41%、75.18%、75.51%。在属水平上,复合乳酸菌液中Lactiplantibacillus(73.25%)为优势菌属;蔬菜废弃物原液中Latilactobacillus(73.66%)为优势菌属;接种后发酵液中Lactiplantibacillus为优势菌属,随着发酵不断进行,相对丰度从64.14%(0h)增至70.33%(16h)、71.47%(24h),说明产乳酸过程以Lactiplantibacillus为主导。 (3)固定化复合乳酸菌在发酵时间20h时,响应面优化得到发酵产乳酸的最佳条件为:温度37℃、初始pH 6.5、接种量19.2%(微球80g),在此条件下得到的最大乳酸产量为16.56g/L,转化率为70.12%。与复合乳酸菌液发酵相比,乳酸产量及转化率分别提高了40.82%、31.66%。固定化复合乳酸菌3次回流发酵的乳酸产量分别为16.37g/L、16.35g/L、15.96g/L,分别占初次发酵乳酸产量的98.85%、98.73%、96.38%,仍在96%以上,说明复合乳酸菌可循环使用。 (4)乙酸乙酯、正丁醇、正丁醛的适宜萃取条件均为萃取相比1.5∶1、萃取时间5min、萃取温度35℃,乳酸萃取率分别为43.21%、41.32%、36.73%,乳酸纯度分别为87.77%、80.23%、80.45%,乙酸乙酯的萃取效果最好。多次萃取以4次为最优萃取次数,乙酸乙酯、正丁醇、正丁醛的乳酸萃取率分别为67.45%,66.72%、58.74%,比单次萃取明显增加,乳酸纯度分别为88.32%、85.40%、86.00%,乙酸乙酯中的乳酸纯度较高;等分萃取以8份为最佳等分份数,乙酸乙酯、正丁醇、正丁醛的乳酸萃取率分别为59.68%、52.87%、47.87%,比单次萃取有一定的提升;比4次萃取有所降低,但萃取剂用量减少3倍,三种萃取剂中的乳酸纯度分别为84.80%、80.63%、83.84%,乙酸乙酯中的乳酸纯度较高;多级逆流萃取最佳级数为乙酸乙酯9级、正丁醇10级、正丁醛11级,乙酸乙酯、正丁醇、正丁醛中的乳酸纯度分别为90.85%、84.82%、88.20%,根据萃取级数和乳酸纯度,乙酸乙酯为最佳萃取剂。最终确定以乙酸乙酯为萃取剂,采用多级逆流萃取,乳酸分离效果最好。

摘要： 1刊登范围本刊主要刊登植物、动物和微生物基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等组学，分子医学、现代生物技术等应用生物学研究的未发表的创新性研究成果，以及上述领域的综述论文。2栏目设置本刊设置固定栏目和随机栏目。固定栏目常设研究论文，发表最新的原始研究成果。随机栏目根据稿源设述评及其他栏目。3投稿要求3.1电子文稿本刊采用计算机排版，只接受电子文稿，请作者通过本刊在线投稿平台(https://***)投稿。