关键词:
生物催化
共表达
表达条件优化
摘要:
为解决酶法制备硫辛酸关键手性中间体(R)-8-氯-6羟基辛酸乙酯中的辅酶循环再生问题,将羰基还原酶基因Cat_(S126A/R129Q/V194A)和葡萄糖脱氢酶GDH基因构建在同一质粒中,成功构建了3种单质粒共表达载体,筛选出最佳单质粒共表达载体pETDUET。研究了2个酶在双启动子双表达载体中的顺序,考察了反应中的关键酶Cat_(S126A/R129Q/V194A),选择*** BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)作为生物催化剂。优化该表达系统的表达条件,结果表明:*** BL21(DE3)/pETDUET-GDH-Cat_(S126A/R129Q/V194A)的最适诱导温度为25℃,最适诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L,最适诱导OD_(600)为3.0。优化后的比酶活达20.8 U/mg(湿细胞),较优化前提高了64%。在此基础上,以共表达优化条件下培养的重组菌为催化剂,以8-氯-6-氧代辛酸乙酯(ECOO)为底物,开展100 mL反应体系研究。研究结果表明:质量浓度为100 g/L的重组菌可以在6 h内将220 g/L的ECOO还原成(R)-8-氯-6-羟基辛酸乙酯((R)-ECHO),收率达96%,ee为98%。