关键词:
荧光检测
实时PCR
共聚焦光路
硬件电路设计
摘要:
核酸检测广泛应用于临床诊断、生物分析、环境监测等领域,对疾病诊断和基础研究具有重要意义。随着新冠肺炎疫情的爆发,对样本快速、高通量检测的需求急剧增加。与传统核酸检测方法相比,自动化核酸检测系统具有低成本、节省时间和便携等优点。本课题组为突破传统核酸检测技术的局限,研制了一种基于实时PCR(Polymerase chain reaction)的便携式核酸检测系统,用于传染病病原体的即时检测。该系统包含一体化的核酸检测卡盒和用于驱动卡盒的便携式检测装置,可以实现“样本入,结果出”的全自动检测。为了保证系统的紧凑,在有限的空间内集成了光学、温度和运动控制模块,用于核酸的提取、纯化、扩增和检测。其中荧光模块是最重要的模块之一,因为它的性能直接影响检测结果的精确度和灵敏度。
基于以上背景,为便携式核酸系统设计了一种高集成度和高灵敏度的一体式双通道荧光模块,其硬件主要由几何光路和控制电路组成。其中光路结构基于共聚焦原理,将两组不同波长的激发-发射光路耦合在一起,所有的光学元件可以放置在三维打印的框架盒体之中,与电路板焊接之后成为光电一体的荧光模块,提高了模块的集成度。硬件电路包括微控制器外围电路、光源驱动和光电信号处理电路。其中对于激发光源,采用电流-光强双反馈的发光二极管(Light emitting diode,LED)驱动电路,从而提高激发光源的稳定性。对于光电信号,采用光电二极管前置放大电路以及相应的滤波电路采集微弱的荧光信号并提高信噪比。所有光学和电子元件都集成在一个55 mm×45 mm×15mm的金属盒中,从而屏蔽环境中的电磁干扰。为了适应各种荧光染料或探针的激发和发射,一共组装了两个不同的模块:模块1#:470 nm/525 nm,570 nm/630 nm;模块2#:520 nm/570 nm,630 nm/690 nm。
电路测试结果表明,激发光源光强可达427μW,5 s内波动±0.07%,10 min内波动±0.11%。使用荧光素钠溶液测试470 nm激发光通道的检测灵敏度,检测限为0.077n M。最后,将这两个模块集成到课题组自研的便携式系统中进行乙肝病毒浓度梯度检测和新冠假病毒不同基因靶点的多重检测。本文设计的荧光模块可以完成实时PCR检测并具有良好的检测性能。