关键词:
狂犬病病毒
Vero细胞
生物反应器
微载体
罐外消化
放大培养
摘要:
目的探讨微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器对狂犬病病毒(rabies virus,RABV)CTN-1Ⅴ株产毒能力的影响。方法将第140代Vero细胞于37℃培养72~120 h后,按1∶4的细胞密度比传代扩增至10层细胞工厂,继续培养72~120 h;将单层致密细胞消化后接种至30 L生物反应器,微载体7~10 g/L,培养温度37℃,pH(7.0~7.4),溶氧30%~80%,搅拌速度10~50 r/min,连续灌流培养72~120 h,共培养3批;微载体Vero细胞经罐外细胞消化后放大培养至300 L生物反应器,微载体5~8 g/L,培养温度37℃,pH(7.0~7.4),溶氧30%~80%,搅拌速度30~80 r/min,灌流培养72~120 h;按MOI=0.05接种RABV CTN-1Ⅴ株,每24 h收获病毒液1次,检测病毒滴度和抗原含量。结果30 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为1×10^(7)个/mL;300 L生物反应器微载体Vero细胞培养96 h后密度约为7.4×10^(6)个/mL。病毒接种96 h达峰值,病毒平均滴度为6.8 lgLD50/mL,抗原平均含量为2.58 IU/mL。结论微载体Vero细胞从30 L生物反应器经罐外细胞消化放大培养至300 L生物反应器的工艺稳定可行,对RABV CTN-1Ⅴ株的产毒能力影响较小,可为RABV灭活疫苗大规模生产提供参考资料。