关键词:
秩边透水道
弱精子症
针刺
死亡受体途径
外源性凋亡
摘要:
目的通过观察“秩边透水道”针法对弱精子症小鼠睾丸组织死亡受体途径上关键因子的影响,探析针刺对小鼠生殖功能的改善作用。方法将30只C57BL/6雄性小鼠随机分成空白组、模型组和针刺组(各10只)。空白组给予等体积的0.9%氯化钠溶液灌胃,模型组和针刺组小鼠给予环磷酰胺(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))腹腔注射5 d,造模完成后针刺组小鼠给予“秩边透水道”连续针刺治疗2周,每日1次,每次20 min,其余两组只进行固定,治疗完成次日进行取材。日常观察小鼠的一般情况并记录体质量变化,检测小鼠睾丸、附睾指数以及精子质量,通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中睾酮(testosterone,T)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)含量,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察睾丸组织病理形态,脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色观察睾丸组织细胞凋亡情况,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time PCR,RT-PCR)法和免疫印迹法(western blot,WB)分别检测睾丸组织Fas细胞表面死亡受体(fas cell surface death receptor,Fas)、FasL、肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor alpha-like,TNF-α)、TNFR1、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)、死亡受体5(death receptor 5,DR5)、半胱氨酸蛋白酶(cysteine-aspartic acid protease,Caspase)-8、Caspase-3 mRNA和蛋白表达变化;免疫荧光法检测睾丸组织cleaved Caspase-3和多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]阳性表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量减轻(P<0.01),睾丸、附睾质量和系数下降(P<0.01),精子总数、精子活力和精子活率下降(P<0.01),血清T、FSH和LH含量下降(P<0.01),睾丸和附睾组织病理形态变差,阳性细胞凋亡量提高(P<0.01),FasL、Fas、TNF-α、TNFR1、FADD、Caspase-8、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平提高(P<0.01,P<0.05),TRAIL、DR5 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),Cleaved Caspase-3和PARP阳性表达量提高(P<0.01)。与模型组比较,针刺组小鼠治疗后体质量无明显变化(P>0.05);睾丸、附睾质量和系数提高(P<0.01);精子总数、精子活力和精子活率提高(P<0.01),血清T、FSH和LH含量提高(P<0.01),睾丸和附睾组织病理形态改善;阳性细胞凋亡量降低(P<0.01);FasL、Fas、TNF-α、TNFR1、FADD、Caspase-8、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),TRAIL、DR5 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),cleaved Caspase-3和PARP阳性表达量降低(P<0.01)。结论“秩边透水道”针法可以改善弱精子症小鼠生精细胞凋亡,提高生殖功能,其机制可能与调节睾丸组织死亡受体途径上的关键因子有关。