关键词:
补肾生精调和气血方
卵巢储备功能减退
Wnt/β-catenin信号通路
细胞周期蛋白D1
c-MYC
大鼠
摘要:
目的基于Wnt/β-catenin信号通路观察补肾生精调和气血方对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠的影响。方法60只8周龄SD雌性大鼠随机分为对照组、模型组、戊酸雌二醇组和中药低、中、高剂量组,每组10只。除对照组外,其余组单次腹腔注射环磷酰胺75 mg/kg复制DOR大鼠模型。造模次日开始,给药组分别予相应药液灌胃,连续3周。观察大鼠一般状况,ELISA检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_(2))、抗米勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)含量,HE染色观察卵巢组织形态,Western blot检测卵巢组织糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、c-MYC蛋白表达,免疫组化染色检测卵巢组织β-catenin蛋白表达,RT-qPCR检测卵巢组织Wnt1、Wnt2、Wnt4、GSK3β、β-catenin、CyclinD1、c-MYC mRNA表达,透射电镜观察卵巢颗粒细胞超微结构。结果与对照组比较,模型组大鼠进食饮水量减少,体质量增长缓慢甚至降低,动情周期紊乱,血清FSH、LH含量升高(P<0.01),E_(2)、AMH、INHB含量降低(P<0.01);卵巢组织各级卵泡数量减少、闭锁卵泡增多,颗粒细胞排列紊乱;卵巢组织GSK3β蛋白表达升高(P<0.01),β-catenin、CyclinD1、c-MYC蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),β-catenin阳性表达降低(P<0.01),卵巢组织Wnt1、Wnt2、Wnt4、β-catenin、CyclinD1、c-MYC mRNA表达降低(P<0.01),GSK3βmRNA表达升高(P<0.01);卵巢颗粒细胞线粒体、粗面内质网等细胞器高度肿胀,部分溶解。与模型组比较,各给药组大鼠体质量不同程度增加,动情周期部分恢复,血清FSH、LH含量降低,E_(2)、AMH、INHB含量升高(P<0.01,P<0.05);卵巢组织各级卵泡数量不同程度增多、闭锁卵泡减少;卵巢组织GSK3β蛋白表达降低,β-catenin、CyclinD1、c-MYC蛋白表达升高,β-catenin阳性表达升高,卵巢组织Wnt1、Wnt2、Wnt4、β-catenin、CyclinD1、c-MYC mRNA表达升高,GSK3βmRNA表达降低,其中戊酸雌二醇组和中药高剂量组差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);卵巢颗粒细胞线粒体、内质网等细胞器轻度肿胀。结论补肾生精调和气血方可改善DOR模型大鼠卵巢功能,调节血清性激素水平,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。