关键词:
补气活血合剂
缺血再灌注
神经功能
p-Akt
外泌体
工程化组织构建
摘要:
背景:补气活血合剂在治疗气虚痰瘀型缺血性脑卒中方面显示出显著的临床效果,但其具体作用机制有待进一步明确。目的:探究补气活血合剂对脑缺血再灌注模型大鼠神经功能、p-Akt及血清外泌体表达的影响。方法:40只6周龄雄性SPF级SD大鼠随机分配至假手术组、模型组、合剂组、合剂+GW4869组,每组10只。模型组、合剂组、合剂+GW4869组使用线栓法建立大脑中动脉栓塞大鼠模型,假手术组给予切开分离、不插线栓。缺血2 h后拔除线栓进行再灌注,再灌注2 h后,合剂组予补气活血合剂灌胃(6.49 g/kg,分3次给药),合剂+GW4869组在造模后前3 d,每次灌胃补气活血合剂前2 h给予外泌体抑制剂GW4869腹腔注射[2.5 mg/(kg•d)],假手术组与模型组灌胃等量生理盐水,3次/d,连续7 d。干预7 d后,检测各组大鼠神经功能、脑梗死体积、脑组织形态、大脑梗死区p-Akt、血清外泌体浓度表征及血清外泌体标志蛋白CD63、TSG101的表达水平。结果与结论:①造模后,与假手术组相比,模型组、合剂组、合剂+GW4869组神经功能评分均显著升高(P<0.01或P<0.05);干预7 d后,合剂组评分较模型组及合剂+GW4869组显著降低(均P<0.01);②2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色结果显示,模型组、合剂组以及合剂+GW4869组中皆发现缺血侧梗死灶;与模型组和合剂+GW4869组大鼠脑梗死体积比较,合剂组显著缩小(P<0.01);③苏木精-伊红结果表明,合剂组和合剂+GW4869组相较于模型组神经细胞的形态结构异常程度较轻,但仍有部分细胞显示出核固缩和胞质凝集的特征;④纳米颗粒跟踪分析技术分析结果显示,分离出的颗粒直径从60-300 nm不等,与外泌体的特征大小范围一致;⑤Western blot结果显示,与假手术组相比,模型组梗死区p-Akt及血清外泌体标志蛋白CD63、TSG101表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,合剂组梗死区p-Akt及血清外泌体标志蛋白CD63、TSG101表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与合剂组相比,加用GW4869后,梗死区p-Akt及血清外泌体标志蛋白CD63表达水平明显下降(P<0.05),TSG101表达有下降趋势,但无明显统计学差异;⑥提示补气活血合剂可能通过促进外泌体释放增强缺血侧皮质区p-Akt的表达,改善脑缺血再灌注模型大鼠神经损伤。