关键词:
水生拉恩菌
鞭毛基体相关蛋白
FliL
基因
克隆
原核表达
序列分析
三级结构
摘要:
[目的]为了研究水生拉恩菌鞭毛基体相关蛋白FliL基因的分子结构特征及其功能解析。[方法]设计FliL基因特异性引物,采用PCR方法扩增基因序列,将其亚克隆至pMD18-T载体进行DNA测序及生物信息学分析,进一步构建重组质粒pET32a-FliL转化大肠杆菌,经IPTG诱导原核表达及SDS-PAGE蛋白电泳分析。[结果]FliL基因测序片段为539 bp,推导ORF编码蛋白166 aa;蛋白电泳分析显示pET32a-FliL融合蛋白分子量为36.6 kDa,与预期分子量大小一致。该蛋白具有抗原表位(62-81aa)、跨膜区(15-37aa)和Pfam FliL结构域(64-165aa)。FliL二级结构以α-螺旋、无规卷曲为主,三级结构(3D)预测为丝状鞭毛蛋白。蛋白质相互作用分析发现FliL与多个鞭毛相关蛋白以及Ⅲ型分泌系统(T3SS)效应分子存在一定相互作用关系。[结论]完成水生拉恩菌FliL基因的克隆和原核表达,获得的表达产物分子量为36.6 kDa,对该蛋白抗原表位、跨膜区和Pfam FliL结构域进行功能解析,为该菌分子致病机制及亚单位疫苗研究提供理论依据。