关键词:
仿刺参肠
抗凝血活性
岩藻聚糖硫酸酯
结构解析
摘要:
以仿刺参肠为原料,提取得到粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱柱分离得到3种多糖(SCG1~SCG3)。采用PMP柱前衍生高效液相色谱法、高效凝胶渗透色谱法对3种多糖的单糖组成、分子质量进行分析;采用活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、纤维蛋白原(fibrinogen,FIB)含量评价多糖的抗凝血活性,筛选高抗凝血活性多糖;通过理化性质分析、红外光谱分析、核磁共振波谱分析对高抗凝血活性多糖进行结构分析。结果显示,仿刺参粗多糖的提取得率为2.75%,按照多糖SCG1~SCG3的顺序,岩藻糖的比例逐渐升高,SCG3仅含有岩藻糖;分子质量逐渐升高,其中SCG3分子质量为171.5 kDa。3种多糖对APTT延长作用逐渐增强,SCG3的延长作用高于阳性对照低肝素,20μg/mL时可达500 s以上;SCG3对PT延长作用最强,200μg/mL时可达500 s以上,SCG1、SCG2作用不明显;SCG2、SCG3对TT均有显著延长作用,且SCG3作用最明显,50μg/mL时可达500 s以上,SCG1几乎没有延长作用;SCG3质量浓度超过50μg/mL时可显著降低FIB的含量。因此,SCG3是一种多机制高抗凝血活性多糖。结构分析结果显示,SCG3的总糖质量分数为50.36%,蛋白质量分数为0.67%,硫酸基质量分数为28.31%,表明SCG3是一种硫酸化岩藻多糖,即岩藻聚糖硫酸酯。红外光谱、核磁共振波谱进一步验证SCG3是一种高纯度岩藻聚糖硫酸酯,主要由糖基→3)-α-L-Fucp-(1→、→3)-α-L-Fucp(2SO_(4))-(1→及→3)-α-L-Fucp(2,4SO_(4))-(1→组成。