关键词:
糖尿病视网膜病变
丹黄明目汤
液相色谱-串联质谱
抗炎
抗氧化
p38丝裂原活化蛋白激酶
超氧化物歧化酶
过氧化氢酶
摘要:
目的探讨丹黄明目汤对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的潜在治疗作用。方法采用液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术检测丹黄明目汤入血成分。采用网络药理学分析丹黄明目汤的药效成分及其治疗DR的关键通路及潜在靶点。将60只大鼠随机分为未造模组(24只)和造模组(36只)。将24只未造模组大鼠分为空白组(等体积生理盐水)、空白给药组(等体积生理盐水+1.25 g/kg丹黄明目汤浸膏),每组12只。造模组腹腔一次性注射40 mg/kg链脲佐菌素(streptozocin,STZ)联合高脂饲养建立DR模型后,分为模型组(40 mg/kg STZ)、阳性对照组(40 mg/kg STZ+羟苯磺酸钙胶囊0.09 g/kg)、丹黄明目汤样本组(40 mg/kg STZ+1.25 g/kg丹黄明目汤浸膏),每组12只,连续干预4周。生化试剂盒检测超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的活性;ELISA检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6和血清炎症因子IL-1β的水平;Western blot检测大鼠视网膜组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)和细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)的蛋白表达水平。结果LC-MS/MS结果表明,丹黄明目汤中共检测到347个入血化合物,其中前7个含量较高的入血代谢物分别为1,7-bis(4-hydroxyphenyl)heptan-3-one、5-hydroxy-2,2-dimethyl-10-(2-methylbut-3-en-2-yl)pyrano[3,2-g]chromen-8-one、5,7,4'-Trimethoxyflavone、Cillin、Deacetylto mentosideI、canescinA CanescinA、VentiloquinoneI。网络药理学结果显示,丹黄明目汤可能通过调节丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、紧密连接和趋化因子信号通路等关键生物通路的多靶点干预DR。与空白组相比,模型组SOD、CAT水平及p38 MAPK、ERK1/2总蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),TNF-α、IL-6、IL-1β水平及p38 MAPK、ERK1/2磷酸化水平升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,阳性对照组、空白给药组和丹黄明目汤样本组的SOD、CAT、TNF-α、IL-6、IL-1β水平及p38 MAPK、ERK1/2磷酸化水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论丹黄明目汤可通过调节MAPK信号通路抑制p38 MAPK等因子的表达和活性,促进SOD和CAT的表达,从而减轻DR的炎症反应、氧化应激、血管损伤,最终起到治疗DR的作用。