关键词:
芪菟二至方
化疗所致骨髓抑制
网络药理学
作用机制
UPLC-Q-TOF-MS
摘要:
探究芪菟二至方(QTEZ)改善化疗所致骨髓抑制的作用机制及其拆方分别对三系造血细胞作用的侧重。采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术鉴定QTEZ肠吸收液成分并获取作用靶点,与从OMIM等多个数据库中收集的化疗所致骨髓抑制靶点取交集,基于网络药理学建立交互网络,进行基因本体论(GO)功能分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。小鼠腹腔注射5-氟尿嘧啶进行骨髓抑制造模后取骨髓造血干细胞,随机分为模型组、芪菟二至方组、黄芪当归组、女贞子墨旱莲组、补骨脂菟丝子组和阳性药组,分别给予相应中药肠吸收液及阳性药粒细胞集落刺激因子,取正常造血干细胞为对照组,予生理盐水干预。通过流式细胞术观察细胞周期和集落形成实验观察三系造血祖细胞增殖情况。采用Western blot验证QTEZ对通路蛋白磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(phosphorylated PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及磷酸化AKT(phosphorylated AKT,p-AKT)的影响。采用RT-qPCR和Western blot检测QTEZ对细胞周期相关靶点蛋白细胞周期依赖性蛋白激酶抑制蛋白1(P21)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的影响。结果表明,QTEZ共鉴定出158个成分,获得375个成分-疾病交集靶点,构建网络后获取21个核心成分和40个核心靶点,GO和KEGG富集显示PI3K/AKT等信号通路。QTEZ及其拆方可以促进5-氟尿嘧啶阻滞的细胞周期恢复运行,对集落均有不同程度的恢复作用,其中QTEZ恢复效果最佳,黄芪当归组对红细胞集落形成单位作用有所侧重。Western blot结果表明各组通路蛋白表达量无显著差异。RT-qPCR和Western blot结果表明QTEZ可以下调P21,上调CDK4和CCND1蛋白和mRNA表达。综上,QTEZ及其拆方可以通过促进细胞周期正常运行和集落形成对5-氟尿嘧啶损伤的骨髓抑制造血干细胞发挥保护作用,其机制可能与下调细胞周期相关靶点蛋白P21,上调CDK4和CCND1有关,其中黄芪和当归对红细胞具有针对性保护作用。