关键词:
健脾活血方
肝纤维化
网络药理学
AMPK/Hippo信号通路
摘要:
目的:网络药理学和实验探究健脾活血方干预肝纤维化的作用靶点及机制。方法:检索TCMSP获得健脾活血方各药物的活性成分;检索GeneCards、OMIM、TTD和DrugBank数据库预测肝纤维化疾病靶点;活性成分与靶点交集预测健脾活血方治疗肝纤维化靶点。运用Cytoscape 3.8.0构建“药物-成分-靶点-疾病”网络;运用STRING数据库以0.700为标准构建蛋白质-蛋白质互作网络;运用R软件进行GO富集和KEGG通路富集分析。实验选取人星状细胞LX-2培养,分为空白对照组、模型组[使用5ng转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导]和观察组(5 ng TGF-β1诱导+健脾活血方干预),CCK-8法检测中药干预细胞最佳浓度,免疫印迹法(Western Blot,WB)检测各组肝纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、金属基质蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,Timp-1)、结蛋白(Desmin)、胶原蛋白I(Collagen I)表达,WB检测各组AMPK和Hippo信号通路蛋白表达。结果:筛选出114个主要活性成分,涉及146个基因靶点,其中主要活性成分包括木樨草素、槲皮素、β-谷甾醇、当归素、白桦酸等;核心靶点基因包括TNF、IL-6、PTGS2、TP53、MAPK1、JUN、ESR1等;富集到GO生物过程661个、细胞组分467个、分子功能115个,包括AMPK、TNF、Hippo等KEGG信号通路164条。CCK-8结果表明0.625 mg/mL和1.25 mg/mL健脾活血方干预LX-2细胞增殖最佳;WB结果表明相比空白对照组,模型组α-SMA、Collagen I、Desmin、Timp-1表达增高,相比模型组,观察组α-SMA、Collagen I、Desmin、Timp-1表达降低(P<0.05);WB结果表明相比空白对照组,模型组p-YAP、p-TAZ和p-AMPK表达降低,YAP、TAZ、AMPK表达升高,相比模型组,观察组p-YAP、p-TAZ和p-AMPK表达增高,YAP、TAZ、AMPK表达降低(P<0.05)。结论:健脾活血方治疗肝纤维化的机制与健脾活血方多成分多靶点干预AMPK和Hippo信号通路等多通路相关。