关键词:
网络药理学
桑黄总黄酮
高尿酸血症
炎症
尿酸转运蛋白
摘要:
目的基于网络药理学和实验验证探究桑黄总黄酮(total flavonoids of Phellinus igniarius,TFPI)抗炎、降尿酸的作用机制。方法通过TCMSP和TCMID数据库筛选桑黄活性成分和有效靶点,使用DisGeNET数据库进行高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)疾病靶点筛选,取交集靶点使用STRING数据库构建蛋白相互作用网络,采用Metascape数据库进行基因本体(GO)及京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,利用微生信进行可视化处理。构建尿酸钠(monosodium urate,MSU)晶体诱导的HK-2细胞损伤模型,给予TFPI干预。通过氧化敏感探针(DCFH-DA)检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,酶联免疫法(ELISA)检测炎症因子,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测基因和蛋白表达水平,对部分网络药理学结果预测结果进行实验验证。结果网络药理学结果表明,TFPI治疗HUA的关键靶点涉及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)和Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、NLRP3及核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)。与模型组相比,TFPI处理可有效抑制MSU诱导的HK-2细胞凋亡,降低细胞内ROS荧光水平,降低细胞上清液中IL-6、IL-1β、IL-18和TNF-α含量;Western blotting结果显示,TLR4、NLRP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、YAP、TAZ、ABCG2和OAT1的蛋白相对表达水平均显著下降,β-TRCP和URAT1蛋白相对表达水平显著增加;qRT-PCR结果表明,ABCG2和OAT1的mRNA的表达显著增加,URAT1的mRNA的表达显著下降。结论研究证实了网络药理学的部分预测结果,表明TFPI通过多成分、多靶点、多通路的途径发挥抗炎、降尿酸作用,为临床应用提供了科学依据。