关键词:
地黄环烯醚萜苷类
2型糖尿病
转化生长因子-β(1 TGF-β1)/细胞信号转导分子3(Smad3)
胶原蛋白-3(ColⅢ)
基质金属蛋白酶-9(MMP-9)
摘要:
目的:观察地黄环烯醚萜苷类(RIG)成分对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病小鼠肾脏的保护作用,并探讨其机制。方法:雄性C57BL/6J小鼠72只,随机抽取12只为正常组,其余60只进行高脂饲料喂养6周联合60 mg·kg^(-1)链脲佐菌素连续注射4 d进行2型糖尿病造模,造模成功后随机分为模型组、二甲双胍组(250 mg·kg^(-1))、梓醇组(100 mg·kg^(-1))、地黄环烯醚萜苷类低剂量组(RIG-L,200 mg·kg^(-1))和地黄环烯醚萜苷类高剂量组(RIG-H,400 mg·kg^(-1)),每组11只。各给药组小鼠灌胃对应药物,正常组和模型组给予等体积去离子水灌胃,1次/d。干预8周后,进行口服糖耐量(OGTT)实验,并计算OGTT曲线下面积(AUC),处死小鼠并剥离双肾组织。测定小鼠体质量、双肾质量、空腹血糖(FBG);生化试剂盒检测血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清胰岛素(FINS)含量,计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化法(IHC)检测肾脏组织白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(1 TGF-β1)、胶原蛋白-3(ColⅢ)的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织TGF-β1、细胞信号转导分子3(Smad3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、ColⅢ蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量、ISI显著降低(P<0.01),肾脏绝对质量、FBG、AUC、FINS、HOMA-IR、TC、TG、SCr、BUN水平显著升高(P<0.01),肾组织出现肾小球肥大、肾小囊腔窄小及胶原沉积,肾组织IL-1、IL-6、TNF-α、TGF-β1、ColⅢ、Smad3蛋白表达水平显著升高(P<0.01),MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠体质量变化差异无统计学意义;各给药组小鼠肾脏绝对质明显降低(P<0.05,P<0.01);RIG-H组小鼠给药第4~8周及二甲双胍、梓醇和RIG-L组小鼠给药第6~8周,FBG显著降低(P<0.01);RIG-L、RIG-H和二甲双胍组小鼠AUC明显降低(P<0.05,P<0.01);各给药组小鼠血清TC、SCr、BUN水平明显降低(P<0.05,P<0.01),RIG-L、RIG-H和二甲双胍组小鼠TG明显降低(P<0.05,P<0.01);梓醇组、RIG-L和二甲双胍组小鼠FINS显著降低(P<0.01);各给药组小鼠HOMA-IR显著降低(P<0.01);各给药组小鼠ISI显著升高(P<0.01);镜下各给药组小鼠肾脏组织病变均得到不同程度改善;各给药组小鼠肾脏组织IL-1、TGF-β1蛋白,RIG-H和二甲双胍组小鼠肾脏组织IL-6、TNF-α、ColⅢ蛋白及RIG-L小鼠肾脏组织IL-6、TNF-α蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),梓醇组小鼠肾脏组织IL-6、TNF-α、ColⅢ蛋白及RIG-L小鼠肾脏组织ColⅢ蛋白含量呈下降趋势,差异无统计学意义;RIG-H和二甲双胍组小鼠肾脏组织TGF-β1、Smad3、ColⅢ蛋白表达显著降低(P<0.01),各给药组小鼠肾脏MMP-9蛋白表达量显著升高(P<0.01)。结论:地黄环烯醚萜苷类可以改善糖尿病小鼠肾组织结构和功能,其机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。