关键词:
气管
气道类器官
3D培养
气道炎症
脂多糖
慢性呼吸道疾病
摘要:
目的构建气管组织来源的气道类器官(AO),探究脂多糖(LPS)刺激后对该AO细胞存活及炎症因子表达的影响。方法游离小鼠气道组织,在体外经机械分离和胶原酶消化为单细胞,Matrigel重悬后在3D环境下培养,待其自发形成具有空腔样囊状结构,通过叉头框蛋白J1(FoxJ1)、Muc5AC、P63、CC10免疫荧光染色鉴定该囊状结构的细胞组成。待稳定传代至第5代后,加入0(对照组)、1、5、10、20μg·m L^(-1)的LPS刺激,通过活(钙黄绿素)、死(碘化丙啶)染色检测细胞的存活情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的m RNA表达。结果原代上皮细胞经3D培养后,自发形成囊状空腔样结构,并随着培养时间的延长,可见球形结构逐步增大,表面凸起较多新的细胞团。免疫荧光染色发现该AO包含纤毛细胞(FoxJ1^(+))、杯状细胞(Muc5AC^(+))、基底细胞(P63^(+))、棒状细胞(CC10^(+))。LPS刺激后,与对照组比较,活死染色显示10μg·m L^(-1) LPS诱导细胞死亡,并显著上调IL-1β、IL-6和TNF-α的m RNA表达(P<0.05、0.01)。结论成功构建小鼠气管组织来源AO炎症模型,可用于评估气道上皮细胞与炎症间的相互作用。