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关键词： 树突状细胞   器官移植   免疫耐受   免疫抑制   程序性细胞死亡蛋白配体1   T细胞   调节性T细胞   炎症因子  

摘要： 目的构建DA大鼠骨髓来源程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-LI)hi耐受性树突状细胞(tol-DC)并鉴定其免疫学功能。方法提取DA大鼠骨髓细胞,联合应用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和重组小鼠白细胞介素(IL)-4,体外培养6 d诱导骨髓细胞分化为未成熟树突状细胞(imDC);应用脂多糖刺激细胞成熟,继续培养2 d收集成熟树突状细胞(mDC);加入PD-L1慢病毒载体病毒原液或同等剂量慢病毒病毒原液,培养2 d后收集PD-L1^(hi)tol-DC和Lv-imDC。应用倒置相差显微镜及透射电镜观察PD-L1^(hi)tol-DC形态;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法及流式细胞术检测细胞表面特异性标志物表达水平。将imDC、mDC、Lv-imDC及PD-L1^(hi)tol-DC分别与Lewis大鼠脾脏来源CD8^(+)T细胞共培养,酶联免疫吸附试验检测各组上清液炎症因子水平,流式细胞术分析各组T细胞凋亡及调节性T细胞(Treg)分化情况。结果经PD-L1基因修饰构建的PD-L1^(hi)tol-DC形态符合tol-DC特征,表面CD80、CD86、主要组织相容性复合体(MHC)表达水平较低。与CD8^(+)T细胞混合培养后,PD-L1^(hi)tol-DC组上清液IL-10、转化生长因子(TGF)-β1水平较高,肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-17A水平较低,T细胞凋亡及Treg分化增多。结论通过慢病毒载体过表达PD-L1可成功诱导构建DA大鼠骨髓来源PD-L1^(hi)tol-DC,促进抑炎因子分泌及T细胞凋亡,诱导Treg分化,抑制同种异体CD8^(+)T细胞免疫反应,这为下一步器官移植免疫耐受研究提供了实验依据。

关键词： MyD88   siRNA   RNAi   狂犬病病毒  

摘要： 为探究MyD88在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)感染中的作用,本实验针对MyD88的mRNA靶序列设计并合成3对不同的siRNA序列,利用脂质体瞬时转染BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对BV2细胞中MyD88的干扰效率。结果显示,转染24 h后,各实验组中MyD88 mRNA表达量均显著低于阴性对照组,其中siRNA-M174的效果最佳、siRNA-M587次之;将200 nM siRNA-M174、siRNA-M587转染BV2细胞24 h后,经计算,干扰效率分别为75.35%和71%,两者共转染后,干扰效率为86.5%。结果表明,本实验成功筛选出靶向MyD88基因的有效干扰序列。脂质体瞬时转染筛选出的2对siRNA于BV2细胞,RABV接种BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测。接毒后转染24 h,实验组MyD88基因的mRNA表达量低于阴性对照组,MyD88蛋白及RABV的N蛋白表达量下降。本实验结果证实了MyD88基因被特异性siRNA干扰后,也影响RABV的蛋白合成,为后续MyD88与狂犬病病毒的互作研究提供实验依据。

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒   抗原表位   结构蛋白   非结构蛋白   次要囊膜蛋白   多表位定向疫苗  

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种基因组为单股正链的RNA病毒。PRRSV毒株不断发生突变和重组,在感染的猪体中一般为多种毒株并存,给我国的养猪业健康发展造成巨大的损失。免疫接种是预防PRRS最有效的措施,而PRRSV蛋白抗原表位是设计疫苗的重要靶点。以PRRSV的非结构蛋白、主要结构蛋白以及次要囊膜蛋白基因编码的不同区域为特征,对已鉴定并报道的PRRSV蛋白抗原表位,分别进行简要的综述,为深入探究PRRSV对机体细胞感染的过程找寻新的研究思路,同时也为针对性的多表位定向疫苗的研制工作奠定基础。

关键词： 环境内分泌干扰物   水生生态系统   迁移与转化   生物富集   去除技术  

摘要： 环境内分泌干扰物(EDCs)是一类广泛存在于环境中的化学物质,因其持久性和生物累积性,对水生生态系统构成重大威胁。系统综述了EDCs的主要类型及其来源,分析了其在水体、沉积物和生物体中的迁移与转化机制,并探讨了其对水生生物个体及生态系统的影响。评估了现有去除技术,包括物理、化学和生物方法,指出了现有技术的局限性与不足,并提出了加强长期监测、优化去除技术及推动国际合作的未来研究方向,以期为深入理解EDCs的环境行为及其治理提供科学依据。

关键词： 核心素养   课程标准   初中数学教材   SEC一致性  

摘要： 从核心素养的角度出发,本研究挑选了人教版、北师大版及苏科版三个版本的2024年初中数学新教材“有理数”内容习题为研究对象,运用SEC一致性分析模型,围绕整体一致性、内容主题及认知水平三个层面,与《课标(2022年版)》进行对比分析.分析结果表明,从整体一致性看,苏科版教材习题与《课标(2022年版)》的一致性系数高于临界值,而人教版与北师大版则低于临界值;从内容主题看,三版教材习题在数学核心素养考查上各有侧重;认知水平方面,北师大版与《课标(2022年版)》的一致性更高.建议教材编写者加强习题与课标的对接,确保习题难度、类型和考查点符合要求,并均匀分布核心素养及认知水平的考查.同时,教材编写者和教师应广泛借鉴各版教材的优点,完善习题体系,促进学生全面发展.

关键词： 情境   光合作用   呼吸作用   初中生物学   核心素养  

摘要： 本次教学设计以“长丰温室草莓的生长、储藏、运输”创设真实情境,关注学生的学习经历,激发学生学习兴趣和探究欲望,通过任务驱动引导学生阅读图文、分析资料,从光合作用和呼吸作用的原理分析温室的草莓为什么又大又甜,生产、储藏和运输过程中如何提高和保证其品质,逐步发展学生的科学思维能力,培养学生的生物学学科核心素养。

关键词： 非洲猪瘟病毒   p22蛋白   单克隆抗体   抗原表位  

摘要： [目的]采用原核表达系统表达并获得非洲猪瘟病毒(ASFV)p22重组蛋白,并进一步制备、鉴定p22重组蛋白的单克隆抗体。[方法]采用PCR方法扩增ASFV p22蛋白编码基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-p22,并通过IPTG诱导表达p22蛋白。将纯化后重组蛋白免疫小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合制备单克隆抗体。通过Western blotting鉴定单克隆抗体特异性,通过ELISA方法测定腹水效价;利用在线软件预测p22蛋白抗原表位分布情况并合成重叠多肽,通过Dot blotting鉴定抗体识别的抗原表位。[结果]本研究成功构建了p22重组蛋白的原核表达质粒,获得原核系统表达的p22重组蛋白,分子质量约为22 ku。用纯化后p22蛋白作为免疫原免疫小鼠,成功筛选到4株阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别为1G3D7G11、2G5H6H8、6D10G7D6和8F6F8B9,其腹水效价均达到1∶500 000。Western blotting结果显示,4株单克隆抗体均能与p22蛋白发生特异性反应。单克隆亚型鉴定结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8和6D10G7D6株单克隆抗体的重链均为IgG1类,8F6F8B9株单克隆抗体的重链为IgG2a类,4株单克隆抗体轻链均为Kappa型。Dot blotting检测结果显示,1G3D7G11、2G5H6H8株单克隆抗体识别抗原表位位于第58—89位氨基酸处;8F6F8B9株单克隆抗体识别抗原表位位于第126—150位氨基酸处。[结论]本研究成功制备了4株ASFV p22蛋白的单克隆抗体,并初步鉴定了单克隆抗体所识别的B细胞表位区间。研究结果为p22蛋白的生物学功能研究和ASFV血清学检测提供了参考依据。

关键词： A型塞内卡   VP2蛋白   原核表达   多克隆抗体   竞争ELISA  

摘要： 依据A型塞内卡病毒(SVA)结构蛋白VP2基因序列构建原核表达质粒pET-30a-VP2,经转化和诱导,表达出VP2重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,采集血清获得VP2的多克隆抗体。用间接ELISA方法测定血清中VP2抗体效价,并用Western blot与IFA验证其特异性。随后建立竞争ELISA方法,并对实验室收集的2016-2019年广西11个地区64个规模猪场592份猪血清进行SVA抗体检测。结果显示,诱导表达出的重组VP2蛋白主要以可溶性形式表达,血清中VP2抗体效价大于1∶64000,且制备的VP2抗体能特异结合SVA感染细胞中的VP2蛋白。竞争ELISA检测结果显示广西地区猪场SVA血清阳性率高达76.6%,血清样品阳性率高达55.9%,研究结果为SVA的检测和研究奠定了基础。

关键词： 高职院校   创业教育   创业教育生态系统  

摘要： 为适应新时代创业教育与学生成人成才的新要求,高职院校需要着力构建多主体联动、多层面实施、多方位辐射的创业教育生态系统。高职院校创业教育生态系统具有开放联动性、实践互动性和功能集成性,高职院校是创业教育生态系统建设的主体,政府是创业教育生态系统建设的主导,行业企业是创业教育生态系统建设的动力,社会组织是创业教育生态系统建设的有力支撑。构建与优化高职院校创业教育生态系统,需要将创业教育置于学校小环境与社会大环境中统筹考量,培育校内创业文化,完善创业教育师资队伍与课程体系,推进产学研用一体化,构建交互式评价反馈机制等,实现校内外动态协同教育,促成学生创业精神的生根、创业能力的提升。

关键词： 犬细小病毒病   高度致死性   病原特性   犬类   犬细小病毒性肠炎   流行病   幼犬   预防措施  

摘要： 犬细小病毒病又称犬细小病毒性肠炎或传染性出血肠炎,是流行于犬类的一种急性、烈性的高度致死性传染病。感染犬细小病毒病的犬类短时间内出现明显的呕吐、腹泻等症状,发病周期短,发病急促,一经发现极易在犬类中传播。通过调查发现,自2014年起,犬细小病毒病已经成为影响犬类寿命的重要病因,研究发现未接种疫苗的犬类感染犬细小病毒病的死亡率接近100%,成年犬死亡率为10%,幼犬死亡率91%,因此为解决该流行病,笔者针对该病的病原特性、流行情况以及临床表现,提出预防措施,以获得良好的预防效果。