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关键词： 核苷酸结合寡聚化结构域样受体3   Ⅰ型单纯疱疹病毒   病毒性脑炎   氧化应激   细胞免疫  

摘要： 目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLRP)3在Ⅰ型单纯疱疹病毒性脑炎模型小鼠中的作用。方法60只SPF级雄性小鼠,其中NLRP3野生型(WT)小鼠30只,NLRP3敲除型(KO)小鼠30只,将NLRP3野生型分为WT-对照组、WT-模型组,NLRP3敲除小鼠分为KO-对照组、KO-模型组;WT-模型组、KO-模型组小鼠接种Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSVⅠ)悬液建立病毒性脑炎(HSE)模型,接种5 d后对小鼠脑脊液进行白细胞计数、病毒滴度检测,测定脑组织水分含量与氧化应激水平,蛋白免疫印迹法检测脑组织核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)样受体相关蛋白、氧化应激相关蛋白、T细胞亚群特异细胞因子蛋白相对表达情况。结果WT-对照组、KO-对照组小鼠状态良好,WT-模型组、KO-模型组小鼠出现眼角红肿溃烂、反应迟钝、抽搐等现象;与WT-对照组、KO-对照组相比,WT-模型组、KO-模型组小鼠脑脊液的白细胞计数(WBC)较高,脑组织湿重与含水量高,丙二醛(MDA)表达升高,干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-4、IL-17、叉头框蛋白(FOX)P3表达水平升高,总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)表达低,核因子E2相关因子(Nrf)2、血红素氧化酶(HO)-1、醌氧化还原酶(NQO)-1降低;KO-模型组病毒滴度、脑组织湿重与含水量、MDA、FN-γ、IL-4、IL-17、FOXP3低于WT-模型组,T-AOC、SOD、Nrf2、HO-1、NQO-1高于WT-模型组(P<0.05);KO-对照组、KO-模型组小鼠的脑组织中未检出NOD样受体相关蛋白,WT-模型组NLRP3、ACS、C aspase-1表达水平高于WT-对照组(P<0.05)。结论NOD样受体表达可能与脑组织氧化应激水平有关,其在HSE模型小鼠中高表达可激活氧化应激损伤及参与细胞免疫调节。

关键词： 中高温大曲   微生物多样性   风味物质   相关性  

摘要： 为探讨中高温大曲主要微生物与挥发性风味物质的相关性,进一步明确大曲对白酒酿造过程的重要意义,本研究利用高通量测序技术、顶空固相微萃取-气相色谱-质谱(HS-SPME-GC-MS)技术分析了不同时期中高温大曲微生物群落结构组成及挥发性风味物质的动态变化,并用Spearman相关系数探究了微生物与挥发性风味物质间的相关性。结果表明,从4个大曲样品中共检出3个优势细菌门和17个优势细菌属,3个优势真菌门和11个优势真菌属,不同时期大曲样品共有优势细菌属为明串珠菌属(Leuconostoc)、魏斯氏菌属(Weissella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)等,共有优势真菌属为毛霉属(Rhizomucor)、假丝酵母属(Candida);从4个大曲样品中共检出醇类、酸类、醛酮类、吡嗪类、酯类、芳香类、萜烯类等56种挥发性风味物质;相关性结果表明,Fructilactobacillus、假单胞菌属(Pseudomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)与糠醛、2-吡咯甲醛等醛酮类呈极显著正相关,芽孢杆菌属与吡嗪类呈极显著相关(P<0.01),假丝酵母属、根霉属(Rhizopus)和毕赤酵母属(Pichia)分别与芳香类、醇类和酯类呈显著性相关(P<0.05)。

关键词： 水痘-带状疱疹病毒   开放阅读框7   空斑纯化  

摘要： 目的分离纯化经基因改造的水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)Oka-7S毒株,并进行检定,为新型水痘减毒活疫苗Oka-7S株毒种库的建立奠定基础。方法将Oka-7S毒株在人二倍体细胞2BS株上进行2次空斑纯化,挑选多株空斑进行扩增传代,根据细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)及病毒滴度选择CPE典型的毒株。对分离的毒种进行病毒滴度、基因序列及蛋白检测,并按照《中国药典》三部(2020版)方法对毒株进行质量检测。结果成功筛选获得2株Oka-7S候选毒株,鉴别试验表明候选株为VZV,连续传代后病毒滴度维持在6.0 lgPFU/mL以上;Western blot检测病毒主要抗原gE蛋白正常表达,未检测到ORF7蛋白,Oka-7S毒株在传代过程中主要基因序列ORF62和编码gE的ORF68核酸序列均未发生突变;2株Oka-7S毒株无菌、支原体、外源病毒因子检测结果均为阴性。结论成功筛选出2株新型VZV Oka-7S毒株,可作为新型水痘疫苗的候选疫苗株。

关键词： 病毒性脑炎   儿童   T淋巴细胞亚群   白细胞介素-17   白细胞介素-12  

摘要： 目的探究T淋巴细胞亚群、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-12(IL-12)检测在小儿病毒性脑炎(VE)中的应用及临床价值。方法选择2019年1月至2022年1月郑州大学附属儿童医院收治的96例VE患儿(VE组),和同期健康儿童96例,VE患儿于治疗结束后根据格拉斯哥预后量表(GOS)评级分为预后良好(4~5级)、预后不良(1~3级);所有儿童均采集外周血标本,检测T淋巴细胞亚群、IL-17、IL-12水平,对比检测结果,并通过受试者工作特征(ROC)曲线及其曲线下面积(AUC)分析检测结果对VE患儿预后的评估价值。结果与对照组比较,VE组患儿CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)比值水平降低(P<0.05),CD8^(+)、IL-17、IL-12水平升高(P<0.05);VE组患儿IL-17、IL-12均与CD3^(+)(r=-0.517,-0.531,P<0.05)、CD4^(+)(r=-0.572,-0.568,P<0.05)及CD4^(+)/CD8^(+)比值(r=-0.631,-0.608,P<0.05)呈正相关,均与CD8^(+)呈负相关(r=0.508,0.537,P<0.05);VE组中,与预后良好者比较,预后不良者CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)比值水平降低(P<0.05),IL-17、IL-12水平升高(P<0.05),CD8^(+)水平比较差异无统计学意义(P>0.05);ROC曲线分析显示,CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比值、IL-17、IL-12及四者联合评估VE预后不良的AUC为0.660、0.741、0.758、0.797、0.886,四者联合评估效能最高,诊断敏感度和特异度为90.00%和70.15%。结论VE患儿存在T淋巴细胞水平失衡和IL-17、IL-12水平升高,T淋巴细胞亚群指标与IL-17、IL-12水平存在相关性,CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)比值、IL-17、IL-12四者联合可用于评估预后。

关键词： 生草栽培   土壤养分   杂草群落   微生物群落   果实品质  

摘要： 【目的】比较不同生草种植对桃园土壤理化性质和微生物群落结构的影响,为我国南方桃园土壤的培肥和可持续经营提供绿色高效技术支撑。【方法】于2019年10月,在浙江省建德市园旺桃园试验基地进行生草种植田间试验。设置行间播种紫云英(Astragalus sinicus)、白三叶(Trifolium repens)、鼠茅草(Vulpia myuros)、自然生草大巢菜(Vicia sativa)和清耕对照(CK)5个处理,测定了2022年桃树盛花期和果实成熟期土壤pH、有机质以及有效氮磷钾含量,调查各个处理小区的杂草种类、土壤微生物群落结构,分析了果实产量和外观品质。【结果】生草覆盖区杂草种类显著低于清耕处理区,紫云英、白三叶、鼠茅草和自然生草大巢菜处理区的杂草种类分别为9、10、11和6种,而CK处理区的杂草种类达到18种。与CK处理相比,4个生草处理土壤碱解氮、有效磷、速效钾含量均有所增加,以鼠茅草处理的增幅最大,春季土壤pH以紫云英处理最高。紫云英处理的土壤细菌的alpha多样性各指数值均大于CK处理,且土壤细菌独有的OTU数目较高,白三叶、鼠茅草、大巢菜处理的土壤细菌的alpha多样性指数多低于CK处理;4个生草处理土壤的真菌OUT数多低于CK。相比于CK,白三叶处理显著提高了酸杆菌门(Acidobacteria)百分比,紫云英、鼠茅草处理显著增加子囊菌门(Ascomycota)百分比。4个生草处理相比,鼠茅草处理提升果实横径、糖度和单株产量的效果最好,其次是紫云英。相关性分析结果表明,细菌多样性与土壤理化性质之间存在显著相关性,其中迷踪菌门(Elusimicrobia)、硝化螺旋菌门(Nitrospirae)、Dependentiae、Latescibacteria、纤维杆菌门(Fibrobacteres)与土壤理化性质存在正相关关系。PCA主成分分析结果进一步表明,鼠茅草、白三叶处理对果实品质、单株产量以及土壤理化性质影响较大。【结论】连续种植生草可增加桃园土壤的速效养分和有机质含量,抑制杂草生长。自然生草抑制杂草的效果最好,但降低了土壤细菌多样性,且微生物结构与清耕处理无显著差异,而种植鼠茅草和紫云英能提升土壤细菌的丰富度,且鼠茅草在提升土壤养分方面的效果更佳,因而改善果实品质的效果最好。

关键词： 小儿轮状病毒性肠炎   维生素AD   葡萄糖酸锌   IL-6   INF-γ  

摘要： 目的:探究维生素AD联合葡萄糖酸锌治疗小儿轮状病毒性肠炎疗效及对血清白介素(IL)-6和γ干扰素(INF-γ)的影响。方法:选取安阳市妇幼保健院收治的108例轮状病毒性肠炎患儿分为对照组与联合组,每组54例。对照组予以葡萄糖酸锌治疗,联合组在对照组基础上联合维生素AD治疗,均治疗5 d。比较两组临床疗效、症状改善时间、免疫功能指标[免疫球蛋白(Ig)A、IgG、IgM]、炎症指标(IL-6、INF-γ)间差异,分析两组用药安全性。结果:联合组总有效率高于对照组(P<0.05);联合组高烧、腹泻、腹痛及呕吐等症状的缓解时间及粪常规检查恢复正常时间均显著低于对照组(P<0.05);治疗后,两组血清IL-6、INF-γ水平显著降低,且联合组显著低于对照组(P<0.05);治疗后,两组IgA、IgG、IgM均显著高于治疗前,且联合组均显著高于对照组(P<0.05)。结论:维生素AD联合葡萄糖酸锌治疗小儿轮状病毒性肠炎疗效较单行葡萄糖酸锌治疗效果更佳,可快速缓解症状,且具有用药安全性,其作用机制可能与改善炎症反应,增强免疫功能相关。

关键词： 猪捷申病毒   VP1蛋白   原核表达   间接ELISA  

摘要： 旨在建立针对猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)5型的间接ELISA检测方法,为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原,以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该病原亚型众多,不同亚型间临床表现差异较大,且缺乏高效、特异的血清学检测方法,阻碍了对PTV-5的防治。本研究针对危害较大的PTV-5构建了pET-30a-VP1重组质粒,通过原核表达获得了VP1蛋白,以纯化的VP1为包被抗原,经条件优化成功建立了针对PTV-5的间接ELISA方法。该方法与常见猪源病毒标准阳性血清无交叉反应,最低检测稀释度为1∶3200,批内与批间变异系数均低于10%,具有良好的特异性、敏感性和重复性。利用该方法对东北地区279份临床样本进行检测,其阳性率为67.74%,与报道的流行情况相符。本研究建立的间接ELISA检测方法综合评价良好,为PTV-5的临床检测提供技术支持。

关键词： 高尔基体   细胞器   应激反应   糖基化   骨代谢  

摘要： 在哺乳动物的生长发育和损伤修复过程中,细胞器在受到来自机体内部或外界干扰时,通过一系列复杂的调控机制实现自我调节,以维持细胞稳态,这一过程被称为细胞器应激反应。高尔基体是细胞内一个关键的细胞器,不仅参与细胞内蛋白加工修饰、脂类代谢及囊泡转运等生理活动,还在离子稳态、应激反应中发挥着重要作用。骨代谢是一个维持骨骼健康的重要且复杂的过程,涉及成骨细胞、破骨细胞等多种细胞的协同作用。在这一过程中,高尔基体的应激反应有助于维持骨骼细胞的内稳态和生理功能。本文综述了高尔基体应激反应的研究进展,包括结构、功能、触发因素、信号转导途径,以及对骨组织细胞功能的影响,旨在为骨疾病的治疗提供新的思路。

关键词： 登革热1型病毒   全基因组测序   基因分型   分子特征  

摘要： 目的对2023年江苏省出现的一起登革热本地疫情的病毒分子特征,为疫情的防控提供依据。方法采集疑似登革热患者急性期的血清样本,通过实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)进行病毒检测和血清分型。阳性标本扩增全长基因组片段,并进行二代测序和相关进化分析。结果江苏省常州市在2023年10月18日至21日发现4例登革确诊病例,病例间存在流行病学关联,认定为一起登革热疫情。4例患者血清RT-qPCR结果均为登革热1型,其中3例获得了全基因组序列。E基因与全基因组进化树显示3个序列均位于基因型1-Ⅰ型的第3分支上,与2023年广东、云南两省的登革病毒流行株高度同源。氨基酸变异位点分析显示这3个病例序列共有16个分支特有的氨基酸位点的改变,其中C蛋白和prM蛋白各有1个变异位点,E蛋白有2个,非结构蛋白中NS5变异位点最多(9个)。结论此次江苏本地疫情是由登革热1型病毒引起,核苷酸序列与国内其他地区的毒株相似性较高,同时出现了氨基酸位点的改变。

关键词： 肝片吸虫   实验室检测   分子生物学   免疫学  

摘要： 肝片吸虫病是广泛分布在全世界的食源性人畜共患寄生虫病。肝片吸虫(Fasciola hepatica)分布广泛,感染可引起宿主贫血、胆管阻塞等,从而导致宿主营养不良、发育受阻、生产减缓,严重威胁着人畜安全、畜牧业的健康发展,同时引起食品安全问题。因此,需要快速、准确的检测方法鉴定和检出病原肝片吸虫。迄今为止,肝片吸虫的检测方法主要有病原学方法、分子生物学、免疫学方法等。本文就以上检测方法的研究进展进行概述,将为肝片吸虫的实验室诊断提供参考依据。