关键词:
流感病毒
流感疫苗
MDCK细胞
病毒灭活
摘要:
目的筛选流感病毒在MDCK细胞上的灭活验证方法,并应用于流感病毒灭活前后样品的检测,以期为流感疫苗质量检测提供可靠的方法。方法将适应MDCK细胞的B/Yamagata(BY)、B/Victoria(BV)、H1N1、H3N24种型别的流感病毒分别稀释为10、1、0.1、0.01、0.001、0.0001 lgCCID50/mL后,接种于MDCK细胞,分别采用换液法(吸附1.5 h后弃掉病毒培养液,再加入病毒培养液,每3 d传代1次,共传3代)、补液法(吸附1.5 h后直接补加病毒培养液,每3 d传代1次,共传3代)及《欧洲药典》法(每4 d传代1次,共传3代)培养,每天观察细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,收获各代次病毒液,检测血凝素(hemagglutinin,HA)滴度,确定最佳灭活验证方法。采用最佳灭活验证方法检测流感病毒灭活前后样品。结果换液法和补液法均可在0.1~1 lgCCID50/mL滴度范围内检测到流感病毒,《欧洲药典》法可在1~10 lgCCID50/mL滴度范围内检测到流感病毒,且补液法测得的HA滴度高于其他两种方法,因此,确定补液法为最佳灭活验证方法。采用补液法检测流感病毒灭活前样品均为阳性,灭活后样品均为阴性。结论补液法是流感病毒在MDCK细胞上的最佳灭活验证方法,可用于流感疫苗质量的检测。