关键词:
非小细胞肺癌
Krüppel样转录因子7
细胞增殖
细胞凋亡
肺癌细胞
摘要:
目的通过构建Krüppel样转录因子7(krüppel⁃like factor 7,KLF7)真核表达载体,分析KLF7对肺癌细胞增殖、凋亡的调控作用,为发现非小细胞肺癌(non⁃small⁃cell lung cancer,NSCLC)治疗靶点提供新的线索。方法通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法克隆KLF7完整序列,酶切、连接、测序等试验方法构建过表达载体并验证表达效率。将A594细胞随机分空载实验为对照组和KLF7过表达为KLF7组,采用流式细胞术检测A594细胞周期、凋亡和活性氧变化,EdU检测A594细胞增殖情况,实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、G1/S⁃特异性周期蛋白⁃D1(cyclin D1)、B⁃细胞淋巴瘤⁃2(B⁃cell lymphoma⁃2,Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bcl⁃2⁃associated X protein,Bax)mRNA和蛋白表达水平。结果克隆KLF7 CDS区全长693bp,并连接在pCDNA3.1载体上,构建KLF7过表达载体,提高HEK293T及A594细胞中KLF7的表达水平(P<0.01)。与对照组相比,KLF7组在G1期细胞百分比降低,G2期细胞百分比升高,增殖指数(proliferation index,PI)明显升高,同时EdU阳性细胞比例升高(P<0.01)。与对照组比较,KLF7组活性氧水平受到抑制,细胞凋亡率降低(P<0.01)。与对照组比较,KLF7组PCNA、CyclinD1、Bcl⁃2 mRNA相对表达和蛋白表达水平升高,Bax的mRNA相对表达和蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论本文成功构建KLF7过表达载体,肺癌细胞中,KLF7过表达能促进细胞增殖并抑制细胞凋亡,参与肺癌发生,有望成为新的NSCLC生物标志物。