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关键词： 猫传染性腹膜炎   猫传染性腹膜炎病毒N蛋白   mRNA疫苗   体外转录载体  

摘要： 本研究旨在设计猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV)mRNA疫苗体外转录载体,并评估其转录出的FIPV mRNA疫苗的免疫原性。选取FIPV的核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白,通过序列优化,结合CureVac mRNA技术平台,选择合适的非编码序列、信号肽序列和poly A尾部。将构建完成的目的序列克隆到pBluescript II KS(+)载体上,经过载体的线性化单酶切后,在体外进行转录,合成编码FIPV N基因的mRNA,并经过加帽、纯化和琼脂糖凝胶电泳分析。通过体外转染试验验证抗原蛋白在细胞内的表达情况。在小鼠体内接种FIPV N-mRNA疫苗后,检测其体液免疫和细胞免疫反应。琼脂糖凝胶试验表明,设计的mRNA体外转录载体成功制备出稳定单一的mRNA序列。转染进细胞后,可在12~24 h内稳定表达目标抗原蛋白。ELISA试验结果显示FIPV N-mRNA疫苗在小鼠体内引起了强烈的体液免疫反应,其特异性抗体、IL-4、TNF-α水平明显高于对照组。Elispot试验结果显示FIPV N-mRNA组脾细胞分泌的IFN-γ的含量显著高于对照组。以FIPV N蛋白为抗原的体外转录载体所转录的mRNA疫苗,在细胞内能够高效表达目的蛋白,具有良好的免疫原性,有效引起小鼠的体液免疫和细胞免疫反应。FIPV N-mRNA疫苗有望成为猫传染性腹膜炎的潜在候选疫苗,mRNA体外转录载体的制备为传染性疾病mRNA疫苗的设计与研发提供了重要的参考价值。

关键词： 环状RNA mmu_circ_0000818   地塞米松   MC3T3-E1细胞   RNA测序   凋亡  

摘要： 目的筛选激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)成骨细胞中差异表达的凋亡相关环状RNA(circular RNA,circRNA),并研究其对成骨细胞凋亡的作用及机制。方法(1)培养小鼠MC3T3-E1细胞,分为Control组和dexamethasone(DEX)组;(2)采用Western blot检测各组细胞BCL2-Associated X的蛋白质(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况;(3)提取正常和DEX处理的MC3T3-E1细胞RNA,进行RNA测序,筛选出差异表达的circRNAs,并通过GO和KEGG分析其功能;(4)筛选出差异表达的mmu_circ_0000818并进行细胞水平验证以及UCSC Genome Browser Gateway和circbase网站分析mmu_circ_0000818在染色体的位置和保守性;(5)构建mmu_circ_0000818过表达质粒及小干扰RNA(siRNA)并转染细胞,流式细胞术检测各组MC3T3-E1细胞凋亡情况。结果(1)与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞凋亡升高(P<0.01);(2)根据log2foldchange(≥2)和P值(P<0.05)筛选差异表达的circRNAs,与Control组相比,DEX组中共有234个表达差异的circRNAs,其中上调的138个,下调的96个。差异表达circRNAs的靶基因利用GO和KEGG进行富集分析,Apoptosis(凋亡)和PI3K-Akt signaling pathway(磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路)差异最显著。(3)qRT-PCR结果显示,与Control组相比,DEX组MC3T3-E1细胞中mmu_circ_0000818表达明显升高(P<0.01),UCSC Genome Browser Gateway和circbase分析发现mmu_circ_0000818主要位于17:78712463-78715086,由Crim1基因第6~7外显子环化形成并且在不同物种间具有高的保守性。(4)流式细胞术结果提示抑制mmu_circ_0000818可改善DEX引起的MC3T3-E1细胞凋亡,过表达则促进其凋亡。结论mmu_circ_0000818在DEX处理的MC3T3-E1细胞中显著增高,降低其可抑制DEX引起的细胞凋亡。

关键词： 天然发酵   酵母发酵   果实成熟度   开花植物   醇含量   生态系统   饮酒   酒精  

摘要： 自然界中乙醇很普遍随着开花植物产生的花蜜和果实被酵母发酵,乙醇(酒精)在大约1亿年前就很普遍了。如今,整个生态系统中依然普遍存在乙醇。尤其是在潮湿的热带地区,自然界中全年不断产生乙醇,乙醇含量也最高。典型情况下,果实天然发酵产生的乙醇占果实体积的1%~2%。但在一些地区,比如在巴拿马地区,这一占比可达10.2%,这是因为这里的果实成熟度非常高。

关键词： 渐进式实验教学   流式细胞术   细胞生物学实验   细胞周期   细胞吞噬   细胞凋亡  

摘要： 流式细胞术广泛应用于生命科学研究的各个领域,因其所涉及的原理及操作比较复杂,本科生较难通过一次学习掌握,通过使用流式细胞术检测细胞周期、细胞吞噬和细胞凋亡等3个内容递进的实验,使本科生系统性学习流式细胞术在细胞生物学研究中的应用,这有助于培养其科研思维和实验技能,促进学生主动学习和探索。在教学过程中,设计层层递进的授课内容,讲授流式细胞仪基础知识、荧光信号的收集及显示方法、如何圈门、设置阈值及多荧光检测的荧光补偿等。教学结果表明,“渐进式”的实验设计,加深了学生对流式细胞仪基础知识的理解和掌握,学生逐步学习了细胞标本制备、实验操作和数据处理,提升了学生动手操作与科研分析能力,为科研工作打下了良好的基础,同时探索了先进仪器在本科生实验教学中的应用。

关键词： 中国式现代化   数字科技创新生态系统   数据要素   国家创新体系   新质生产力  

摘要： 本文从“数字科技创新生态系统-国家创新体系能级提升-支撑中国式现代化”的角度探讨数字科技创新生态系统对推进中国式现代化的重要作用,仿照自然生态规律,利用数据能量作为驱动创新体系能级提升的关键要素,运用系统动力学模型仿真模拟数字科技创新生态系统建设在提高产学研协同创新水平、优化科技政策制定机制和提升科技治理精准施策水平方面的重要作用,揭示数字科技创新生态中创新主体的创新行为的生态学特征。基于研究发现,提出通过体制机制创新、激活用好数据要素、强化企业主体地位等路径,推进数字科技创新和数实深度融合、加快发展新质生产力的政策建议。

关键词： 嵌合抗原受体T细胞   造血干细胞移植   护理   病例报告  

摘要： 总结国内首次儿童一站式异体嵌合抗原受体T细胞治疗桥接异基因造血干细胞移植的护理经验,旨在为此类治疗提供临床借鉴意义。护理要点包括多团队制订预见性治疗护理方案;精准管理细胞因子释放综合征;评估与护理多部位出血;预防与管理急性移植物抗宿主病;全程预防与护理感染;管理与长期随访营养状况。经过系统诊治与精细化护理,患儿顺利完成该复杂的方案,最终治疗相关并发症得到控制,原发病缓解,移植成功。患儿住院61 d后顺利出院;随访9个月,情况良好。

关键词： 吴征镒   植物分类   植物学   定名   奠基人  

摘要： “征镒麻属”“征镒卫矛”“征镒荆芥”……在植物世界里,有许多相似的名称,它们都和植物学家吴征镒有关。吴征镒潜心于植物研究70余年,定名和参与定名的植物分类群有1766个,是中国发现和命名植物最多的植物学家,也是中国植物学的奠基人。

关键词： 非洲猪瘟病毒   pS183L   多克隆抗体  

摘要： 旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白pS183L的多克隆抗体。根据公布的毒株ASFV China/2018/Anhui XCGQ基因序列设计引物,酶切连接法构建重组质粒pET-28a-S183L;经鉴定成功的质粒转化大肠杆菌Rosetta,诱导表达后经镍柱亲和层析纯化后获得重组蛋白pS183L,免疫小鼠并制备抗pS183L的多克隆抗体。通过ELISA鉴定多克隆抗体效价大于1∶128000;Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)表明,该多克隆抗体能识别293T和PK15细胞外源表达蛋白及ASFV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)内源表达蛋白。综上,本研究成功制备抗pS183L多克隆抗体,为深入研究ASFV pS183L的功能提供了关键生物材料。

关键词： ERAS   围术期禁食管理   腹腔镜肝叶切除   主观舒适度   肠道功能恢复  

摘要： 研究腹腔镜肝叶切除病人在护理中开展基于ERAS的围术期禁食管理的效果。方法 选取60例腹腔镜肝叶切除病人进行数据研究,分组后,各30例,在护理中,研究组开展基于ERAS的围术期禁食管理,对照组开展传统禁食禁饮,对比组间差异。结果 对比两组不同时间(术前半小时、术后0-6h、术后7-24h)的主观舒适度(饥饿、口渴)得出研究组更低,对比两组不同时间(术后0-6h、术后7-24h)的主观舒适度(咽喉肿痛、恶心)得出研究组更低,P<0.05,对比两组不同时间的腹痛、腹胀为P>0.05。对比对照组,研究组在术后12h的肠鸣音恢复例数明显更多,手术后首次肛门排气以及首次排便时间均明显缩短,并发症显著减少,P<0.05。结论 腹腔镜肝叶切除病人在护理中开展基于ERAS的围术期禁食管理的效果理想。

关键词： 坍塌反应调节蛋白1   慢病毒干扰   人神经母细胞瘤细胞   NLRP3炎症小体  

摘要： 目的:构建靶向坍塌反应调节蛋白1(CRMP1)基因的慢病毒干扰质粒,建立稳定敲减CRMP1的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)稳转细胞系,探讨其对NLRP3炎症小体蛋白表达的影响。方法:以h-CRMP1 mRNA为靶序列设计合成shRNA双链,克隆至PLKO.1载体,构建CRMP1重组干扰质粒。将重组正确的shCRMP1质粒转染HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得的慢病毒上清浓缩后感染SH-SY5Y细胞,Western blot检测SH-SY5Y细胞内CRMP1的干扰效果及其对NLRP3炎症小体各组分蛋白表达的影响。结果:DNA测序结果显示,pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒构建成功;转染HEK-293T细胞包装慢病毒后,细胞内CRMP1蛋白表达下降;慢病毒浓缩液感染SH-SY5Y细胞经嘌呤霉素筛选,Western blot发现shCRMP1慢病毒能显著下调SH-SY5Y细胞中CRMP1蛋白表达。同时稳定敲减CRMP1的SH-SY5Y细胞系中发现,MPP^(+)诱导下,抑制CRMP1表达可有效抑制NLRP3炎症小体活化。结论:成功构建pLKO.1-shCRMP1慢病毒干扰质粒,且干扰CRMP1可抑制MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞NLRP3炎症小体活化,为进一步研究CRMP1在帕金森病等神经退行性疾病中的发生机制奠定基础。