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关键词： 麻疹病毒   拷贝数   吸附力   复制力   致细胞病效应  

摘要： 麻疹病毒基因型流行数量在逐年下降,但B3和D8基因型病毒株却频频出现,并成为近年唯一发现在流行的两个野病毒基因型;我国本土H1基因型在2019年后未再检出。本研究从细胞水平分析了输入B3和D8基因型病毒株、本土H1基因型不同年代分离株及疫苗株在Vero/SLAM细胞上吸附力、复制力和致细胞病变能力的差异性。结果发现,不同分离株间存在不同程度表现型的差异,有可能影响其传播流行的强度。与S_(191)疫苗株相比,B3基因型代表株MV19-1144(B3)在Vero/SLAM细胞上虽具有较低的吸附能力,却有较强复制能力和致细胞病变能力,能快速地在较短时间内达到拷贝数和病毒量的高峰;另一代表株MV18-55(B3)细胞吸附力更强些,早期同样不存在下降期,就开始病毒较强的复制和增殖。MV19-1214(D8)具有较强的吸附能力,更容易感染宿主细胞,但是病毒复制力和致细胞病变能力则较弱;MV20-17(D8)却具有不一样的表现,其吸附力较MV19-1214(D8)弱些,但复制和致细胞病变能力更接近疫苗株病毒。福建省近期的H1基因型分离株MV15-278(H1a)和MV16-189(H1a)虽然在吸附力方面和早期H1分离株相比无统计学差别,但先后出现了复制力和致细胞病变能力的下降,提示在强大的免疫压力下,本土病毒株可能出现了突变,减缓了病毒传播和流行的速度,最终使得H1a基因型在福建的阻断。

关键词： 慢病毒   病毒包装   病毒浓缩   滴度  

摘要： 为优化CD19-CAR慢病毒的生产方法,以获得更优的生产条件,采用慢病毒三质粒包装系统(pLVX,psPAX2,pMD2.G),并利用转染试剂(lipo8000^(TM),Lipofectamine■3000,PEIpro■)进行慢病毒的包装,通过超速离心和超滤技术对慢病毒进行浓缩。并利用流式细胞仪测定慢病毒滴度。研究发现,使用Lipofectamine■3000转染试剂包装的慢病毒原液滴度最高;在pLVX、psPAX2与pMD2.G质量比为4∶3∶1,质粒总量为5μg,质粒总量(m/μg)与转染试剂体积比(V/μL)为1∶5时,慢病毒的滴度达到最高。此外,使用超滤方法浓缩的慢病毒滴度高于超速离心法。尽管使用Lipofectamine■3000包装慢病毒原液滴度最高,但考虑到扩大生产的成本,选择性价比更高的PEIpro■更为适宜。因此,本研究得出的最佳慢病毒生产方法是:使用转染试剂PEIpro■包装慢病毒,在pLVX、psPAX2与pMD2质量比为4∶3∶1,质粒总量为5μg,质粒总量(m/μg)与转染试剂体积比(V/μL)为1∶5,收集48 h和72 h的病毒上清液,并通过超滤方法对慢病毒进行浓缩。

关键词： 物理学科核心素养   习题课设计   案例分析  

摘要： 本文通过对《电磁感应与电磁波初步》章节的物理习题课案例分析,探讨了基于物理学科核心素养培养的物理习题课设计原则和方法。文章首先概述了物理学科核心素养的重要性和内涵,包括物理观念、科学思维、科学探究和科学态度与责任四个方面。接着,提出了以素养为导向的习题课设计原则,强调了情境创设和问题设计的重要性。通过案例分析,展示了如何将核心素养融入习题课设计,并通过具体的习题练习和教学活动促进学生核心素养的发展。研究发现,这种设计能够有效提升学生的物理观念、科学思维、科学探究能力和科学态度与责任,同时提高学习成绩和学习兴趣。最后,文章总结了研究结论,指出了研究的不足,并对未来的研究方向提出了建议。

关键词： 社会—生态系统   适应能力   应对能力   障碍因子   瓦房店市  

摘要： 为加强地区生态环境保护和实现高质量可持续发展,从经济、社会、生态3个子系统以及适应能力和应对能力两个方面构建指标评价体系,运用改进TOPSIS法以及障碍度模型,分析探讨2010—2021年大连瓦房店市社会—生态系统弹性、主要障碍因子、子系统障碍度及其变化特征。结果表明:(1)瓦房店市生态弹性处于中等水平并在0.416—0.566之间波动式变化。(2)瓦房店市社会—生态系统出现频次大于30%的障碍因子有地方一般公共预算收入、人工造林面积、人均道路面积等。(3)从子系统方面看,生态子系统对总体弹性障碍度最大、经济子系统其次、社会子系统最低。

关键词： 犬   猪圆环病毒4型   qPCR检测   相似性   进化树  

摘要： 猪圆环病毒4型(PCV4)于2019年首次在我国湖南省发现,之后在我国河南、山西、广西等地发现猪源PCV4。为了确定PCV4能否感染犬,试验采集江西省南昌市85份死亡犬肾脏,提取总DNA后经PCV4荧光定量PCR(qPCR)检测。结果显示,13份肾脏组织样品呈PCV4阳性(Ct值<39),阳性率为15.29%;对阳性样品采用普通PCR扩增,其中有3份扩增出890 bp的特异性Rep条带并测序,将获得的基因序列与GenBank其他圆环病毒的相应基因进行相似性分析及遗传演化分析,结果3条犬源PCV4 Rep基因氨基酸序列相似性为99.4%~99.5%,与湖南分离株(HNU-AHG1-2019)、河南分离株(Henan-LY1-2019)相似性分别为99.6%~99.7%和98.2%~98.7%,与PCV1、PCV2、PCV3相似性均低于50%,与蝙蝠圆环病毒(BatAcV)相似性为60.7%~63.9%,与犬圆环病毒(CaCV)相似性为60.6%~61.3%,进化树显示这3条PCV4 Rep基因序列与猪源PCV4相应基因处于同一进化分支。首次确认我国存在犬感染PCV4的情况,为PCV4流行病学调查及犬圆环类病毒感染研究提供了基础数据。

关键词： 足三里   类风湿性关节炎   免疫  

摘要： 类风湿性关节炎目前较明确的发病机制是与免疫紊乱有关,其核心治疗药物疗效有限、治疗失败是临床常见的难题。而足三里穴调节机体免疫功能效果显著,也是治疗类风湿性关节炎使用频率最高的穴位。因此,探析针灸足三里后的免疫机理,可以更好地通过细胞、分子解释其发挥效应的机制,如足三里可以通过调节巨噬细胞极化、肥大细胞脱颗粒、抗体介导的体液免疫、血小板活化等改善机体免疫失衡状态,以缓解类风湿性关节炎慢性炎症、疼痛、骨破坏。这些免疫机制的揭示为临床靶点治疗提供了理论基础。

关键词： 反基因锁核酸   转基因小鼠   乙型肝炎病毒  

摘要： 目的探讨基于HBV C反基因锁核酸(Antigene LNA)对转基因小鼠体内病毒活性的抑制效果。方法将24只HBV转基因小鼠随机分为4组(n=6),分别为反基因锁核酸(Antigene LNA)组、拉米夫定(3TC)组、无关序列(NC)组和空白(Blank)组。其中Antigene LNA组、NC组和Blank组小鼠按0.5μg/g注射剂量,分别在第1天、第3天和第5天通过尾静脉注射400μL 5%GLU-阳离子聚合物-Antigene LNA、400μL 5%GLU-阳离子聚合物-无关序列、400μL 5%GLU-阳离子聚合物;而3TC组小鼠按10μg/μL的拉米夫定溶液每天灌胃2次,连续7 d。采用实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA,磁微粒化学发光法检测血清HBeAg、HBsAg,免疫组化检测肝脏HBsAg、HBcAg细胞阳性率,HE染色观察肝、肾组织细胞变化。结果治疗后的第7天,与3TC组、NC组、Blank组比较,Antigene LNA组血清HBeAg、HBV DNA、HBsAg抑制率明显降低,差异有统计学意义(P<0.001)。肝脏组织HBsAg、HBcAg阳性细胞百分比显著下降(P<0.001)。小鼠肝、肾组织细胞结构无明显变化。结论Antigene LNA能有效抑制体内HBV病毒活性,为HBV基因治疗提供新的治疗策略。

关键词： 免疫增强剂CVC1302   体细胞高频突变   免疫机制   生发中心B细胞   胞苷脱氨酶   Pax5  

摘要： 为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA206,每只50μg NP-OVA,免疫后14 d,利用流式分选获得生发中心B细胞,利用巢氏PCR扩增B细胞免疫球蛋白序列可变区VH_(186.2),Western blot检测诱导活化的胞苷脱氨酶(AID)、Pax5表达水平,β-actin作为内参,比较组间AID、Pax5表达差异;利用荧光定量PCR检测AID、Pax5基因转录水平。试验结果显示:CVC1302显著诱导生发中心B细胞免疫球蛋白序列VH186.2突变频率,试验组W33L突变频率为62.2%,而对照组仅为20.25%;CVC1302可提升AID蛋白、Pax5蛋白表达水平,其中试验组AID蛋白相对表达水平为0.72,对照组仅为0.16,试验组Pax5蛋白相对表达水平为0.62,对照组仅为0.26;CVC1302增强AID基因、Pax5基因转录水平,相较于对照组分别提高2.36、4.13倍。推断CVC1302依赖Pax5介导AID表达,调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变。