关键词:
Kisspeptin/GPR54系统
多囊卵巢综合征
颗粒细胞
凋亡
自噬
摘要:
目的分析Kiss-1基因表达物Kisspeptin(Kp)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞分泌、增殖、凋亡和自噬的影响,探讨Kp对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞凋亡和自噬的调控机制。方法采用来曲唑灌胃构建PCOS大鼠模型,分离并培养PCOS大鼠卵巢颗粒细胞,并将细胞分为Kp高、中、低剂量组和模型组,将正常大鼠卵巢颗粒细胞设为正常对照组,共5组。向Kp高、中、低剂量组分别加入浓度1000、100、10 nmol/L的Kp-10培养液。经过24、48、72 h的细胞培养后,采用细胞计数试剂盒8法观察细胞增殖情况,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌功能,实时聚合酶链反应检测细胞培养72 h后凋亡因子[肿瘤蛋白53(p53)、细胞色素C(CytC)]、自噬因子[p62蛋白(p62)、Beclin1蛋白(Beclin1)]mRNA的表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠卵巢组织形态发生变化,血清雌二醇(E_(2))、卵泡刺激素(FSH)水平降低,血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平升高,细胞增殖能力下降,细胞分泌孕酮(P)、E_(2)水平下降,p53、CytC、Beclin1 mRNA表达水平升高,p62 mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,卵巢颗粒细胞培养48 h后Kp高、中剂量组细胞增殖能力均上升,培养72 h后Kp高、中、低剂量组细胞增殖能力上升,Kp高、中、低剂量组分泌P水平升高,p53、CytC、Beclin1 mRNA表达水平降低,p62 mRNA表达水平升高,Kp高剂量组分泌E_(2)水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与Kp低剂量组比较,培养48、72 h后Kp高、中剂量组细胞增殖能力升高,Kp高、中剂量组分泌P、E_(2)水平升高,p53、CytC mRNA表达水平降低,p62 mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与Kp中剂量组比较,培养48、72 h后Kp高剂量组细胞增殖能力升高,Kp高剂量组分泌P水平升高,Beclin1 mRNA表达水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Kp可促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖及分泌,并且可降低PCOS大鼠颗粒细胞中凋亡和自噬因子的表达。