关键词:
洋桔梗
烟草曲茎病毒
遗传进化
广西
摘要:
【目的】明确引起广西南宁市洋桔梗呈现叶脉突起、叶片皱缩的病毒病原,并对病毒分离物的遗传进化关系进行分析,为花卉作物病毒病的综合防控提供理论依据。【方法】以1株具有叶脉突起、叶片皱缩等典型双生病毒症状的洋桔梗为研究对象,采用双生病毒通用简并引物(PA/PB)对洋桔梗叶片总DNA进行PCR检测,通过设计背靠背引物(TbCSV-F/TbCSV-R)、基因克隆获得相关病毒病原的全基因组序列,使用BLASTn对拼接序列进行比对分析,应用生物学软件SnapGene、SDT和MEGA 7.0对相关病毒病原的全基因组序列及遗传进化进行分析。【结果】利用PA/PB引物能从样品中扩增出1条约500 bp的特异目的条带,BLASTn分析发现,所得序列与GenBank上已登录的烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)各分离物的核苷酸序列相似性均在91%以上,证实所采集的洋桔梗植株受到菜豆金色黄花叶病毒属病毒侵染。利用β卫星通用引物(β01/β02)未能扩增出条带,证实染病的洋桔梗叶片中不存在β卫星分子。利用TbCSV-F/TbCSV-R对感病样品总DNA进行PCR扩增,所得产物经纯化、克隆测序及序列拼接后获得1条长度为2743 bp的病毒全基因组序列,所得序列经核苷酸序列相似性分析表明病毒分离物为TbCSV的1个分离物,命名为TbCSV-GX-YJG。氨基酸同源性分析发现,病毒正链编码的AV1和AV2基因与TbCSV-SHJ01(GenBank登录号:MW779539.1)的核苷酸序列和氨基酸序列相似性均最高,为100%。进化树分析发现,TbCSV-GX-YJG与来自于广西(TbCSV-SHJ01)和四川(TbCSV-SC740,GenBank登录号:MH165181.1)的分离物聚在同一个小分支,说明亲缘关系较近;而与来自于云南(TbCSV-CN,GenBank登录号:KM383752.1)、孟加拉国(TbCSV-YT8,GenBank登录号:HG003650.1)、印度(TbCSV-WSF1和TbCSV-TC240,GenBank登录号分别为HQ407395.1和KF551584.1)的分离物处于不同的分支,说明TbCSV分离物具有一定的进化多样性。【结论】侵染广西洋桔梗表现叶脉突起、叶片皱缩的病毒病原为菜豆金色黄花叶病毒属的TbCSV。