关键词:
秦川牛
SFRP 4
肾周前体脂肪细胞
成脂分化
摘要:
旨在探究分泌型卷曲相关蛋白4(screted frizzled related protein 4,SFRP 4)基因对于牛前体脂肪细胞分化的影响,本研究以秦川牛肾周前体脂肪细胞为试验对象,处理组和对照组进行了3个生物学重复。克隆秦川牛SFRP 4基因完整的蛋白质编码区序列,并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术检测该基因在秦川牛各组织及肾周前体脂肪细胞各分化阶段中的表达;筛选有效的牛SFRP 4基因siRNA序列,构建腺病毒过表达载体,分别转染至牛肾周前体脂肪细胞中诱导分化,通过油红O染色、qRT-PCR和蛋白质印迹等试验方法探究SFRP 4基因对肾周前体脂肪细胞分化的影响。结果表明,秦川牛SFRP 4基因CDS全长1041 bp,氨基酸序列与绵羊和山羊具有高度同源性,与小鼠的亲缘关系较远;该蛋白分类为亲水性蛋白,共有24个磷酸化修饰位点;该基因在秦川牛各组织广泛表达,在肾脏和皮下脂肪相对表达量较高。时序表达谱显示前体脂肪细胞分化过程中SFRP 4基因表达量呈现先升高后降低趋势。干扰SFRP 4后,牛肾周前体脂肪细胞脂滴明显减少,脂质细胞成脂分化标志基因PPARγ、FABP4、PLIN2、SCD 1表达水平显著下调(P<0.05),CEBPβ表达水平极显著下调(P<0.01),PPARγ(P<0.05)和CEBPβ(P<0.01)蛋白水平显著下调;过表达该基因后,显著上调PPARγ(P<0.01)、CEBPβ(P<0.01)、FABP4(P<0.05)、PLIN2(P<0.01)、SCD1(P<0.01)基因表达水平,显著上调了PPARγ、CEBPβ、FABP4、SCD1蛋白水平(P<0.05)。以上结果为进一步阐述SFRP 4基因调控牛肾周前体脂肪细胞成脂分化和脂肪沉积提供了重要的依据。