关键词:
肾
葡萄籽原花青素
氧化应激
细胞凋亡
Nrf2信号通路
摘要:
目的研究葡萄籽原花青素(GSPE)对氟诱导大鼠肾脏毒性的保护作用,并探讨核转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在其中的调控作用。方法选用24只SD雄性大鼠(鼠龄为8周,体重为240~260 g),按随机数字表法分为对照组、GSPE组、氟化钠(NaF)组和NaF+GSPE组,每组6只。对照组标准饮食28 d,GSPE组灌胃法给予GSPE(100 mg/kg)28 d,NaF组标准饮食7 d后饮用NaF溶液(600 mg/kg)21 d,NaF+GSPE组GSPE(100 mg/kg)预处理7 d后饮用NaF溶液(600 mg/kg)21 d。实验结束后,检测肾脏氧化应激水平[肾脏丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量,过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性]和肾功能[血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、尿素(Urea)含量];采用苏木素-伊红(HE)染色和原位缺口末端标记法(TUNEL)分别评估肾脏病理学变化和细胞凋亡水平;蛋白质印迹法检测肾脏Nrf2信号通路相关蛋白[Nrf2、血红素氧化酶-1(HO-1)、磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NQO-1)]和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白表达水平。结果与对照组比较,NaF组大鼠肾脏MDA含量较高,GSH含量和SOD、CAT活性均较低(均P<0.001);与NaF组比较,NaF+GSPE组肾脏MDA含量较低,GSH含量及CAT、SOD活性均较高(均P<0.001)。与对照组比较,NaF组大鼠血清Cr、BUN、Urea含量均较高(均P<0.001);与NaF组比较,NaF+GSPE组血清Cr、BUN、Urea含量均较低(均P<0.001)。HE染色结果显示,NaF组大鼠肾小球体积增大,基底膜增厚,肾小管细胞结构紊乱,肾小管上皮细胞出现变性、扩张或者脱落现象,肾间质可见炎性细胞浸润;与NaF组比较,NaF+GSPE组病理学变化均减轻。TUNEL检测结果显示,NaF、NaF+GSPE组肾脏细胞凋亡率[(26.82±2.25)%、(12.83±1.32)%]均高于对照组[(6.22±0.62)%,均P<0.001],且NaF+GSPE组低于NaF组(P<0.001)。与对照组比较,NaF组Nrf2(核内)、HO-1、NQO-1、活化caspase-3蛋白表达水平均较高,而Nrf2(胞质)蛋白表达水平较低(均P<0.001);与NaF组比较,NaF+GSPE组Nrf2(核内和胞质)、HO-1、NQO-1蛋白表达水平均较高,活化caspase-3蛋白表达水平较低(均P<0.001)。结论GSPE可缓解氟诱导的大鼠肾脏毒性作用,可能与激活Nrf2信号通路增强机体抗氧化能力和减轻肾脏细胞凋亡水平有关。