关键词:
卵巢低反应
“秩边”透“水道”
针刺
细胞凋亡
摘要:
目的:观察“秩边”透“水道”针刺对卵巢低反应(POR)小鼠内/外源性凋亡相关因子的影响,探讨针刺对POR小鼠卵巢功能的保护机制。方法:C57BL/6N雌鼠按随机数字表法分为空白组、模型组和针刺组,每组23只。采用雷公藤多苷片混悬液(50 mg·kg^(-1))灌胃制备POR模型。针刺组采用“秩边”透“水道”针刺,每次20 min,每日1次,连续干预14 d。选取30只同品系7~8周龄健康雄鼠与部分雌鼠进行1∶1合笼。阴道脱落细胞涂片观察雌鼠的动情周期变化;观察获卵数,测定卵巢湿重并计算卵巢指数;观察合笼后的妊娠率和胚胎数量;ELISA法检测雌鼠血清低水平抗米勒管激素(AMH)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成激素(LH)、雌二醇(E2)含量;HE染色法观察卵巢组织形态;TUNEL染色观察卵巢细胞凋亡率;实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测卵巢组织半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞因子受体超家族成员6(Fas)、凋亡相关蛋白调节因子(FADD)mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01),妊娠率和胚胎数量明显减少(P<0.01),获卵数、卵巢湿重、卵巢指数明显降低(P<0.01);血清中FSH和LH含量升高(P<0.01),AMH和E2含量下降(P<0.01);卵巢细胞凋亡率明显升高(P<0.01),卵巢组织中闭锁卵泡明显增加、各级卵泡明显减少且颗粒细胞排列紊乱;卵巢组织中Caspase-3、Bax、Fas、FADD mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组相比,针刺组小鼠动情周期紊乱率下降(P<0.01),妊娠数和胚胎数量增多(P<0.01),获卵数、卵巢湿重和卵巢指数增加(P<0.01);血清中FSH和LH含量下降(P<0.01),AMH和E2含量上升(P<0.01);卵巢细胞凋亡率明显降低(P<0.01),卵巢颗粒细胞排列整齐,闭锁卵泡减少、各级卵泡数量增加;卵巢组织中Caspase-3、Bax、Fas、FADD mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01,P<0.05),Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01,P<0.05)。结论:“秩边”透“水道”针刺可以改善POR小鼠卵巢反应降低,其机制可能与调节卵巢组织内/外源性凋亡相关因子的表达有关。