关键词:
α-番茄碱
肝癌
肉瘤病毒癌基因
糖酵解
摘要:
目的探讨α-番茄碱基于鼠类肉瘤病毒癌基因(kirsten rat sarcoma viral oncogene,KRAS)信号通路作用于肝癌细胞糖酵解的机制。方法将肝癌细胞系随机均分为对照组、α-番茄碱低剂量(1μmol·L^(−1))组、α-番茄碱中剂量(2μmol·L^(−1))组、α-番茄碱高剂量(5μmol·L^(−1))组,经过多实验筛选,最终确定5μmol·L^(−1)的α-番茄碱作为人肝癌细胞干预浓度。将Huh7细胞随机均分为对照组、α-番茄碱组、LY294002抑制剂组(25μmol·L^(−1))、α-番茄碱(5μmol·L^(−1))联合LY294002(25μmol·L^(−1))抑制剂组。用3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法测定细胞活力,用穿越小室(Transwell)实验测定细胞的侵袭能力,用划痕实验测定细胞的迁移能力;用蛋白质印迹法(Western blotting)分析B淋巴细胞瘤-2(Bcell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax),KRAS和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)蛋白的表达情况;用邻甲苯胺法检测葡萄糖含量,用对羟基联苯比色法检测乳酸释放量,用比色法检测细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量。结果MTT实验结果表明,α-番茄碱对Huh7细胞增殖有明显的抑制作用。同时,α-番茄碱能抑制细胞侵袭和迁移,抑制葡萄糖消耗、乳酸释放和降低ATP含量,促进细胞凋亡。α-番茄碱在Huh7细胞中激活mTOR/PI3K信号通路,并通过mTOR/PI3K信号通路促进细胞凋亡,抑制细胞的侵袭和迁移能力,进一步抑制糖酵解。结论α-番茄碱通过mTOR/PI3K信号通路抑制糖酵解,降低肝癌细胞的活性及侵袭和迁移能力。