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关键词： 绵羊肺腺瘤病毒   梅迪-维斯纳病毒   重组酶聚合酶恒温扩增技术   快速检测  

摘要： 为建立同时检测绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)和梅迪-维斯纳病毒(MVV)的实时荧光RPA检测方法，本试验基于JSRV env基因和MVV LTR序列的保守区，设计、筛选特异性引物和探针，优化反应体系和反应条件；对该检测方法进行特异性、灵敏性、重复性评估；利用建立的方法对实验室保存的已确诊为JSRV和MVV混合感染的病肺组织进行检测，并与双重PCR法平行对比，计算吻合率。结果显示，该方法可在42 ℃、20 min内完成目标片段的扩增，对于混合感染病肺组织cDNA，JSRV和MVV的最低检测限分别为1 ng/μL和10 pg/μL，该方法检测小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊败血性链球菌(OSS)、牛肠道病毒(BEV)、传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)、肺炎支原体(MO)等继发反刍动物呼吸道症状的病原时呈阴性；分别以浓度为10 ng/μL和100 ng/μL的模板进行重复性试验，组内变异系数为3.6%～9.3%；实验室保存的JSRV和MVV混合感染病肺组织的检测结果与双重PCR法的吻合率为100%。本研究成功建立了JSRV和MVV双重实时荧光RPA检测方法，该方法操作简单、反应快速，结果确实可靠，可用于JSRV和MVV的鉴别诊断及混合感染的快速临床检测。

关键词： 灵芝多糖   肝母细胞瘤   凋亡   自噬   Akt/mTOR信号通路  

摘要： 通过探讨灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharide， GLP）对肝母细胞瘤HepG2、Huh6细胞模型及KM小鼠原位移植瘤模型的作用机制，以期为GLP的临床应用提供理论依据。采用CCK-8法检测细胞活力；BeyoClickTMEdU-488实验检测细胞增殖能力；Hochest 33258染色检测细胞凋亡情况；Mrfp-GFP-LC3双荧光染色检测细胞自噬情况；采用HepG2细胞建立原位移植瘤动物模型，分别用生理盐水及100、200、300 mg·kg-1GLP处理小鼠，分析取材后肿瘤数目和大小的变化；苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色观察肿瘤组织及主要脏器（心、肝、脾、肺、肾）组织病理情况；Western blot法检测细胞中肿瘤抑制蛋白53（tumor protein P53， P53）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bcl-2-associated X protein， Bax）、裂解半胱氨酸蛋白酶蛋白-3（cleaved-caspase-3）、苄氯素-1（Beclin-1）、自噬相关蛋白-5（autophagy related protein-5， Atg-5）、微管相关蛋白轻链-3Ⅰ（microtubule-associated protein-light chain-3Ⅰ， LC3Ⅰ）/LC3Ⅱ、自噬衔接蛋白62（autophagy adapter protein 62， P62）、蛋白激酶B（protein kinase B， Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin， mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）的蛋白表达。体外实验结果显示，与对照组相比，GLP处理后肿瘤细胞活力显著降低，细胞凋亡比例呈剂量依赖性增高，且自噬流被抑制。在体内实验中，与模型组相比，GLP处理后小鼠的肿瘤数目和大小显著下降；Western blot结果显示，与对照组或模型组相比，GLP处理后P53、Bax、cleaved-caspase-3、Beclin-1、Atg-5、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平显著升高，Bcl-2、P62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著降低。这些结果表明GLP能够通过调控Akt/mTOR途径诱导肝母细胞瘤细胞凋亡与自噬。

关键词： 鄱阳湖   水文连通性   碟形湖   细菌群落   真菌群落  

摘要： 水文连通性通过扩散效应和局地理化环境调控对微生物群落结构改变产生重要影响，但仍缺乏水文连通性与湿地微生物群落结构之间的定量研究.本研究在鄱阳湖典型湿地10个碟形湖进行水体细菌、沉积物细菌和真菌样品采集分析，构建了碟形湖水文连通性指标体系，以期定量分析水文连通性对微生物群落结构的影响程度.结果表明: 水体细菌、沉积物细菌和真菌群落α多样性枯水初、中和后期存在显著差异，其中沉积物细菌和真菌群落枯水中期更高; 随着水文连通性的升高，水体细菌α多样性呈下降趋势，沉积物细菌和真菌在中水文连通性下α多样性较高.水体细菌群落β多样性在不同时期差异更明显，沉积物细菌和真菌群落β多样性在空间上差异更明显.湖水面积比(WSP)和水深(WD)是影响水体细菌群落结构的主要水文连通性变量.湖盆高程(LE)和WD是影响沉积物细菌和真菌的主要水文连通性变量.水文连通性对水体细菌群落结构解释率(7.6%)低于对沉积物细菌和真菌群落结构解释率(分别为33.3%和29.7%).其中水文连通性与理化因子对水体细菌群落结构交互解释率为2.4%，对沉积物细菌和真菌群落结构交互解释率分别为9.7%和6.2%.沉积物细菌和真菌分别以随机性和确定性过程主导，水体细菌受确定性和随机性共同主导.中等水文连通性碟形湖水体细菌群落随机性构建过程更强; 沉积物细菌和真菌群落构建随着水文连通性的增强，随机性构建过程减弱.研究结果有助于进一步认识水文连通性对湿地微生物群落结构的影响机制，并为湿地环境保护和修复提供一定的科学依据.

关键词： Cd-As复合胁迫   光合作用   酶学机理   转运蛋白  

摘要： 单一有毒微量元素对牧草的影响已受到广泛关注，但关于多年生黑麦草对Cd-As复合胁迫响应研究较少。为探讨Cd-As复合胁迫对多年生黑麦草的生长特征、光合作用、酶学机理和转运蛋白的影响，本研究在温室种植多年生黑麦草，设置对照组(Cd 0 mg·kg-1， As 0 mg·kg-1)、Cd3As60(Cd 3 mg·kg-1， As 60 mg·kg-1)、Cd3As120(Cd 3 mg·kg-1， As 120 mg·kg-1)、Cd3As180(Cd 3 mg·kg-1， As 180 mg·kg-1)处理组，研究Cd-As复合胁迫对多年生黑麦草累积特征的影响及其酶学机理。结果表明：与Cd3As60相比，高浓度Cd-As胁迫下大瀑布和维纳斯地上部MDA（丙二醛）含量均显著增加（12.93%～24.73%和16.02%～29.98%），抗氧化系统活性增强，叶绿体基质类囊体排列紊乱，细胞壁变薄，细胞核变形，光合作用受阻，使植株矮小（15.12%～28.32%和1.75%～7.20%）、生物量降低（36.22%～54.56%和2.96%～17.82%）；大瀑布地上部和根部Lsi1（硅转运蛋白）含量均显著增加（12.23%～20.06%和13.39%～15.64%），As在地上部和根部可溶组分中的占比增加（2%～11%和1%～12%），细胞受到的As毒害减轻；与Cd3As60相比，高浓度Cd-As胁迫下对维纳斯的毒害增强，根部细胞受损严重，GSH（谷胱甘肽）、PCs（植物络合素）、NPT（非蛋白巯基）含量和CAX（阳离子/H+交换体）、Nramp（天然抗性巨噬细胞蛋白）含量减少，Cd在地上部和根部的累积（8.96%～13.18%和9.47%～18.59%）及其在可溶组分中的占比减少（1%～9%和0%～2%）。研究表明，Cd-As胁迫引起多年生黑麦草氧化胁迫和细胞膜结构受损，非酶物质和转运蛋白含量降低，导致多年生黑麦草对Cd、As的累积降低。

关键词： SARS-CoV-2   核衣壳蛋白   抗病毒药物   天然免疫反应   应激颗粒  

摘要： 新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndromes coronavirus 2, SARS-CoV-2）引发的新型冠状病毒肺炎（Coronavirus disease 19, COVID-19）疫情对全球公众健康造成了巨大危害，能有效防治COVID-19的抗病毒药物仍在探索中。核衣壳（Nucleocapsid, N）蛋白是SARS-CoV-2的关键结构蛋白，通过与病毒基因组RNA和其他结构蛋白结合后组装成病毒颗粒，保护病毒基因组进而促进病毒复制和传播。此外，N蛋白还作为调节蛋白在维持病毒生命周期以及干扰宿主天然免疫反应和应激颗粒组装等方面发挥重要作用。因此，靶向N蛋白的抗病毒策略近年来受到了SARS-CoV-2抗病毒药物研究的广泛关注，如靶向N蛋白的RNA结合域、翻译后修饰以及液相分离等。此外，N蛋白在不同SARS-CoV-2变异株中突变率低，其结构和功能在多种感染人的冠状病毒中也相对保守。因此，靶向SARS-CoV-2 N蛋白的抗病毒药物可能对多种人冠状病毒及其变异株均能发挥作用。本文主要就近年来靶向SARS-CoV-2 N蛋白抗病毒药物的研究进展作一概述与探讨。

关键词： 牛病毒性腹泻病毒   混合感染   病毒   细菌   支原体  

摘要： 牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）在世界各地的牛群中普遍存在。临床上BVDV的急性感染不明显，但这种病毒被认为是引起呼吸道疾病的主要组成部分，其高发病率给全球畜牧业造成了重大经济损失。BVDV混合感染发病率和死亡率较高，感染BVDV牛易受到机会性病毒或细菌性病原的侵袭而形成混合感染，因此，所造成的损失也远远高于单一病原感染。本文综述了BVDV与其他常见病原混合感染的研究进展，通过阐述BVDV与细菌、病毒或支原体混合感染的协同作用或拮抗作用为混合感染疾病的预防和新型疫苗的研制提供参考。

关键词： 微地膜   光照强度   群落结构   碳固定   碳降解  

摘要： 为揭示高温和不同光照条件下微小地膜碎片（微地膜）对土壤微生物群落结构和碳固定/碳降解功能的影响，本研究运用宏基因组测序技术，探究了强、弱光照下4种微地膜（传统黑地膜B、传统白地膜W、可降解黑地膜DB、可降解白地膜DW）对土壤微生物群落结构和碳固定/碳降解功能的影响。结果表明：可降解微地膜对细菌群落结构的影响程度比传统微地膜更强，如强光照下鞘氨醇单胞菌属在B、W、DB和DW组的相对丰度分别下降了30.4%、6.9%、40.8%和51.4%。微地膜对真菌群落结构的影响程度较细菌更显著，如篮状菌属在弱光照添加B微地膜条件下的丰度上升了47.8倍，强光照下B、DB和DW使其丰度增加了2.4、2.1和4.2倍。土壤pH、硝态氮和速效钾与微生物群落结构有显著相关性，光照和微地膜转变了土壤理化性质与微生物群落结构的正、负相关性。弱光照下B、W和DB显著提升了土壤碳固定功能丰度（5.1%～13.1%），强光照下B、DB和DW增加了土壤碳降解功能丰度（17.7%～20.6%）。研究表明，微地膜和光照共同影响土壤微生物群落结构，强光照下添加可降解微地膜的效应总体更显著，同时微地膜在特定光照下对碳固定/碳降解功能有一定促进作用，但可降解与传统微地膜的效应之间差异不大。

关键词： A型塞内卡病毒   遗传进化分析   3A蛋白   多克隆抗体  

摘要： A型塞内卡病毒(senecavirus A，SVA)作为一种可以引起猪水泡样症状的外来病原，与口蹄疫病毒引起的临床症状难以区分。本研究成功分离1株SVA，将其命名为HN2019。经全基因组测序和进化分析发现，该分离株与我国毒株CH-HN-2017亲缘性最高。该毒株可在猪肾传代细胞(PK-15)、乳仓鼠肾细胞(BHK-21)中有效复制增殖，感染后均能产生细胞病变。通过病毒一步生长曲线、间接免疫荧光、Western-blot等试验研究了该毒株的生物学特性。同时，利用pCold-TF质粒构建该毒株非结构蛋白3A的原核表达载体，转化大肠杆菌系统，发现该重组蛋白可在上清中可溶性表达。将纯化后的重组蛋白分4次免疫BALB/c小鼠，成功制备针对3A蛋白的多克隆抗体。该抗体效价为1∶128 000，可特异性识别病毒感染的细胞产生特异性荧光，证明该抗体具有良好的反应性和特异性，为进一步研究SVA 3A蛋白的生物学功能及病毒的致病机制提供有效工具。

关键词： 非洲猪瘟病毒   D250R蛋白   原核表达   多克隆抗体   间接ELISA  

摘要： D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞表达的重组蛋白Flag-D250R均能被ASFV标准阳性血清识别，证明D250R蛋白是ELISA抗体检测方法的潜在靶标。在此基础上，以纯化的重组蛋白为免疫原制备鼠源多克隆抗体，该抗体ELISA效价大于1∶409 600。Western-blot试验表明该抗体与Flag-D250R和His-D250R均具有良好的反应性，证明His-D250R蛋白具有良好的抗原性。进一步以His-D250R蛋白为包被抗原，通过对抗原包被、封闭、抗体孵育、底物反应等条件的优化，建立间接ELISA抗体检测方法。其阴阳性临界值为0.359，检测PRV、PRRSV、PCV2、CSFV等阳性血清结果均呈阴性反应，灵敏度达1∶3 200，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，与商品化试剂盒符合率达98.8%。上述结果表明，基于His-D250R蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性、重复性良好，具备一定临床应用价值，可以为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。