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关键词： 大口黑鲈   大口黑鲈双RNA病毒   VP2蛋白   多克隆抗体  

摘要： 【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒p ET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1 266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒p ETVP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/m L,效价为1∶1 024 000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。

关键词： 流感病毒疫苗   MDCK工程细胞   高效生产  

摘要： 目的：MDCK-STAT1-KO工程细胞已被证实可高效生产H1N1流感病毒，但受限于培养规模和血清依赖性等贴壁培养固有的性质，该细胞株难以应用到实际的疫苗生产中。单细胞悬浮培养易于放大，操作简便，备受疫苗生产青睐。但MDCK-STAT1-KO工程细胞在悬浮培养条件下的病毒生产情况及其病毒感染应激特征尚不清楚，限制了其进一步的应用。方法：采用生产上的常规培养方式（传代培养和批式培养）和接毒条件（MOI=0.001），考察悬浮MDCK-STAT1-KO工程细胞(susMDCK-STAT1-)的生长和病毒生产情况；改变关键接毒参数，考察MOI、营养条件和毒株类型对susMDCK-STAT1-细胞产毒的影响。设置同步感染实验，考察该细胞在病毒感染后的细胞凋亡水平和细胞免疫应激水平。结果：susMDCK-STAT1-细胞生产H1N1病毒的最大HA滴度和最大Svy分别为（12.40 ± 0.11）log2HAU/100μl和（15.86 ± 1.34）×103virions/cell，均为H1N1病毒生产较高水平。同时改变关键工艺参数均不会影响该细胞株高效生产流感病毒的特性。此外，susMDCK-STAT1-细胞具有一定抗凋亡特性，及其胞内全局性的低免疫防御水平，有利于病毒快速扩增。结论：susMDCK-STAT1-细胞可高效生产流感病毒，同时其抗凋亡特性及胞内低免疫水平是该细胞株高效生产的关键因素。该细胞有望未来应用于流感病毒疫苗的实际生产中，提高流感病毒生产水平。

关键词： ZGA   表观遗传   早期胚胎发育   哺乳动物   组蛋白修饰  

摘要： [目的]哺乳动物合子基因组激活（Zygotic Genome Activation，ZGA）是早期胚胎发育的一个关键阶段，标志着早期胚胎的发育调控由母源基因向合子基因转变。DNA甲基化和组蛋白修饰等表观遗传精确调控合子基因或母源基因的激活或抑制，在早期胚胎发育过程中发挥重要作用，但表观遗传因子在哺乳动物ZGA过程中的表达变化仍不清楚。[方法]本研究通过构建山羊早期胚胎发育不同时期胚胎RNA-seq文库，使用生物信息学方法联合分析小鼠、人和牛早期胚胎发育不同时期胚胎RNA-seq数据，分析重要的表观遗传因子在哺乳动物ZGA过程中的表达模式。[结果]在人、小鼠、山羊、牛ZGA过程中分别检测到153、153、87、58个差异表达的表观遗传因子，其中KDM5B、SETD2、EED、MSL2、MTA2、ATXN7L3、YTHDF2、IGF2BP1、ALYREF在人、小鼠、牛和山羊ZGA时期均差异表达；DNA甲基化因子TET1在小鼠、人、牛ZGA时期表达存在显著差异，在山羊ZGA中不差异但表达水平逐渐升高；组蛋白甲基化因子STED2和KDM5B在人、小鼠、牛、山羊ZGA过程中发挥重要作用；组蛋白乙酰化因子MSL2和MTA2在人、小鼠、牛、山羊ZGA时期维持乙酰化的动态平衡发挥重要作用；RNA修饰因子中YTHDF2和IGF2BP1可能参与调控哺乳动物ZGA过程的转录过程。[结论]本试验解析了DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和RNA修饰等表观遗传调控因子在哺乳动物ZGA期间的变化规律，并比较了人、小鼠、牛和山羊的表达模式。本研究为构建哺乳动物ZGA调控网络、剖析表观遗传因子的动态调控作用、预测胚胎发育潜能等提供科学依据。

关键词： 戊型肝炎病毒   病原学   流行病学   诊断   治疗  

摘要： 戊型肝炎病毒（HEV）是导致急性肝炎的重要病原体，部分HEV感染者可进展为肝衰竭，此外，慢性感染和肝外表现可也在HEV感染者中发生。全球每年感染HEV的患者数达2000万，其中330万例患者有肝炎相关的临床症状，年死亡例数约为4.4万（2015年数据）。在我国，HEV以散发流行为主。近年来由于对其研究的重视，HEV病原学、流行病学、临床诊疗和预防取得较大的进展，文章拟对目前HEV防治热点以及新进展进行总结和分析。