关键词:
烟草轻型绿花叶病毒
地黄
RPA恒温扩增
快速检测
摘要:
根据烟草轻型绿花叶病毒(tobacco mild green mosaic virus, TMGMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因设计引物和探针,将重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)和侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了一种TMGMV的快速检测方法,对该检测方法中的反应时间、反应温度进行了优化,并检测了该方法的特异性和灵敏度。试验结果表明,RTRPA-LFD检测体系的最佳反应条件是温度37℃、反应时间30 min。该方法能够特异性检测TMGMV,与其它病毒无交叉反应,对TMGMV CP的最低检测限度为1.65×10~0拷贝·μL-1,比普通PCR检测灵敏度高10倍。该方法灵敏度高、特异性强,能够用于田间地黄样品中TMGMV的检测,便于基层科研单位对该病毒的准确检测和诊断。