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关键词： 洞庭湖   气候变化   水鸟调查   湿地生态系统   干旱指数  

摘要： 随着气候变暖，全球范围内干旱的频率和严重程度正在持续增加，了解干旱对濒危物种的影响对物种保护至关重要。湿地水鸟是湿地生态系统的重要组成部分，对栖息地环境变化极其敏感，经常被用于气候变暖相关研究，是衡量极端干旱的良好指示物种。以天鹅属(Cygnus)小天鹅（Cygnus columbianus）为研究对象，基于2022—2023年度越冬季（极端干旱年）5次同步调查数据，分析洞庭湖区小天鹅的分布和丰度的月度变化，结合历史数据，探讨极端干旱对其种群数量和分布的影响。结果显示：2022—2023年越冬季种群数量从11月（4 736只）持续增长，1月达到峰值（16 592只），然后开始下降，3月仅2 292只。采桑湖、横岭湖、三关咀、东古湖、荞麦湖、白泥湖、大通湖是小天鹅在洞庭湖区的重要栖息地，极端干旱可能是导致2022—2023年洞庭湖小天鹅数量下降并向周边堤垸内湖扩散的主要原因。

关键词： 新型冠状病毒   RNA聚合酶   根皮素   类似物   分子对接   活性测试  

摘要： 目的 探索根皮素对新型冠状病毒RNA聚合酶的抑制活性，并预测3种根皮素类似物小分子的靶酶抑制活性。方法 运用分子对接手段研究根皮素与RNA聚合酶活性位点处的结合模式；利用细胞水平的新型冠状病毒RNA聚合酶nsp7/nsp8/nsp12催化反应体系检测根皮素对RNA聚合酶的抑制活性。选择3种与根皮素结构类似的中药小分子进行靶酶抑制活性预测，应用分子对接方法研究它们与靶酶活性位点间的结合模式。结果 根皮素及其类似物均可较好的结合于RNA聚合酶的活性位点处，占据NTPs通道而阻碍核苷酸底物的进入，进而抑制RNA聚合酶主导的核酸复制。细胞水平上的抑制RNA聚合酶活性测试实验结果表明，根皮素对新型冠状病毒RNA聚合酶具有明显的抑制活性，虽然活性弱于瑞德西韦，但其细胞毒性亦低于瑞德西韦；同时，预测根皮素类似物亦可抑制RNA聚合酶而具有抗新型冠状病毒药理作用。结论 本研究证实根皮素具有RNA聚合酶抑制活性，并预测根皮素类似物小分子亦具有RNA聚合酶抑制活性，结果可进一步为抗新型冠状病毒药物研发提供参考。

关键词： J型禽白血病病毒   全基因组   感染性克隆   病毒拯救   致病性  

摘要： 本研究对湖北某鸡场送检疑似禽白血病感染病死鸡进行剖检，取其组织器官进行病毒分离鉴定、全基因克隆并构建gp85基因遗传进化树，确定该致瘤毒株为J型禽白血病病毒（ALV-J）并命名为HB19。根据HB19毒株全基因序列设计含有同源臂的引物利用无缝克隆方法将毒株基因组序列与克隆载体pUC-19连接，成功构建HB19的感染性克隆质粒pUC-ALV-P1P2P3，将其转染至鸡成纤维细胞（DF-1），进行病毒拯救试验。通过群特异性抗原ELISA检测试剂盒和间接免疫荧光检测，结果均为阳性，表明成功拯救HB19的重组病毒株rHB19。进一步对重组毒株的生物学特性进行研究，结果表明rHB19和HB19不仅在DF-1细胞上的复制能力保持一致，而且在感染雏鸡体内也具有相似的增殖和致病能力。本研究分离得到1株髓细胞瘤型ALV-J毒株并成功建立其反向遗传操作技术平台，为今后探索该毒株的致病机理、致瘤机制以及基因功能等研究奠定了基础。

关键词： 柚皮素   鳜鱼弹状病毒   病毒复制   线粒体凋亡   作用路径  

摘要： 柚皮素是一种具有多种药理学活性的天然二氢黄酮类化合物。鳜鱼弹状病毒（Siniperca chuatsi rhabdovirus， SCRV）是一株能感染多种鱼类的病毒病原，在水产养殖中引发广泛感染并造成巨大经济损失。为了研究柚皮素是否具有抗SCRV复制的效应及可能的作用路径，本研究首先将柚皮素处理SCRV感染的鱼类细胞后，显微镜观察和病毒滴度测定，发现其能有效延缓受染细胞病变发生，并降低子代病毒复制量。RT-qPCR和western blotting分析证实柚皮素可以显著抑制SCRV病毒核蛋白基因的表达。免疫荧光显微镜观察、流式细胞术和caspases酶活分析显示，柚皮素可以通过减少SCRV诱导的细胞线粒体凋亡从而利于细胞抵抗SCRV感染。柚皮素处理引发SCRV感染的细胞内活性氧下降和线粒体膜电位增加进一步证实其对细胞凋亡途径的抑制。综上，本研究初步探讨了柚皮素抗SCRV病毒复制的作用路径，为未来真正建立基于柚皮素的抗鱼类弹状病毒技术或药物筛选提供了前期基础。

关键词： 人呼吸道合胞病毒   金刚烷胺   抗病毒   离子通道  

摘要： 目的 研究离子通道阻断剂金刚烷胺在体内外抗人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, HRSV)感染的活性。方法 以MTT方法测定金刚烷胺对HEp-2细胞的半数毒性浓度，分别将30、60、90和120μmol/L金刚烷胺加入已感染RSV的HEp-2细胞上清，通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验和免疫荧光实验评估金刚烷胺的体外抗病毒活性。将Balb/c小鼠分为Mock组、GZ08-18攻毒组、GZ08-18攻毒加10 mg/kg金刚烷胺治疗组、GZ08-18攻毒加20 mg/kg金刚烷胺治疗组和GZ08-18攻毒加50 mg/kg利巴韦林治疗组。通过小鼠体重变化、存活情况、肺指数、肺泡灌洗液病毒滴度、肺切片免疫荧光、肺组织病理损伤和炎症因子变化等评估金刚烷胺的体内抗病毒活性。结果 体外实验qRT-PCR和免疫荧光结果显示不同浓度金刚烷胺处理后，病毒滴度与病毒融合蛋白表达均显著下降，且具量效依赖性。体内实验结果示，与GZ08-18攻毒组相比，金刚烷胺治疗后小鼠体重下降减缓，存活率显著提高，肺指数和病毒滴度在20 mg/kg金刚烷胺治疗组显著降低，肺组织切片病毒融合蛋白免疫荧光强度明显降低，相关炎症因子表达水平显著下调。肺组织病理切片的H&E染色结果示金刚烷胺明显抑制小鼠肺组织损伤。结论 金刚烷胺在体内外均可显著抑制RSV感染。

关键词： 埃可病毒30型   全基因组   基因进化分析   基因重组分析  

摘要： 湖北省3例婴幼儿病例的咽拭子样本经鉴定均为肠道病毒;年龄均为1月龄;发病时间均为6月龄，均为散发型病例，无明确流行病学关联。VP1基因扩增分析结果显示，3例婴幼儿病例均感染了埃可病毒30型（ECHO30），3例样本分离得到的ECHO30湖北株均归类于H基因亚型的Cluster Ⅲ簇。全基因组扩增分析结果显示，ECHO30湖北株与GenBank中的ECHO30/MW586892/Ashburton/17WQ2027G/USA/2017-08-20同源性最高，核苷酸与氨基酸同源性分别为97.6%和99.3%。重组分析结果显示，ECHO30湖北株在非结构蛋白区存在重组，重组片段可能来自ECHO30/KY888274/14-397/Germany/2013和ECHO18株Echo18/MN815811/BJ2018-S6363/Beijing/2018。本研究对湖北省流行的ECHO30毒株遗传进化进行了深入分析，能够为预防ECHO30感染提供基础数据。

关键词： 犊牛腹泻病   牛轮状病毒   VP4蛋白   原核表达   中和试验  

摘要： 构建牛轮状病毒（BRV）VP4基因重组表达载体，获得重组蛋白并对其免疫效果初步评价，为开发BRV候选基因工程疫苗奠定基础。对BRV VP4基因序列进行密码子偏好优化，构建BRV VP4大肠杆菌原核表达系统，将重组质粒转化到BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达后分析重组蛋白表达形式。用纯化后重组蛋白与弗氏佐剂混合免疫小鼠。间接ELISA方法检测血清中特异性抗体IgG及亚型IgG1和IgG2a水平；最后通过中和试验检测血清中和抗体滴度。结果显示：本研究成功构建了VP4重组蛋白的原核表达系统；VP4重组蛋白表达大小约为80 kDa，与理论大小相符且表达形式为包涵体；VP4重组蛋白具有较高的反应原性；VP4重组蛋白免疫小鼠后能刺激其产生特异性IgG抗体，IgG1和IgG2a检测结果显示，免疫后IgG2a/IgG1的比值均大于1，即偏向于刺激小鼠Th1型细胞免疫。血清中和抗体水平随免疫天数具有增长趋势，42 d时达到顶峰，效价为1:92。本研究成功获得了VP4重组蛋白并制备了VP4蛋白亚单位疫苗，且在小鼠体内具有较好的免疫效果。