关键词:
糖尿病肾病
补肾活血方
内质网应激
细胞凋亡
肾脏保护
摘要:
目的探讨补肾活血方对db/db小鼠肾损伤的影响和作用机制。方法将48只雄性db/db小鼠按随机数字表法分为模型组、补肾活血方低剂量组(0.78 g/kg)、补肾活血方高剂量组(3.12 g/kg)和缬沙坦组(10.40 mg/kg),每组各12只。另设12只同周龄同性别db/m小鼠作为对照组。各给药组给予相应药物,对照组和模型组给予同等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液,灌胃1次/d,连续给药12周。给药期间每4周检测1次空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG),实验结束后检测各组尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)和尿微量白蛋白排泄率(Urinary albumin excretion rate,UAER)。透射电镜观察肾小管上皮细胞超微结构;免疫组化法检测肾脏中GRP78阳性细胞表达;RT-PCR法检测肾组织GRP78 mRNA表达;Western blot法检测肾组织磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phospho-protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,p-PERK)/蛋白激酶样内质网激酶(Protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、磷酸化真核翻译起始因子2α(phosphorylated eukaryotic translation initiation factor 2 alpha,p-eIF2α)/真核起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2 alpha,eIF2α)、活化转录因子4(Activating transcription factor 4,ATF4)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、切割型半胱天冬酶-3(Cleaved-caspase-3)和切割型半胱天冬酶-9(Cleave-caspase-9)蛋白表达。结果与对照组比较,模型组FBG、BUN、Scr、UAER水平明显升高(P<0.01);肾小管区域GRP78阳性表达增加;肾小管上皮细胞出现核膜皱缩,染色质凝聚,细胞核变形等改变;肾组织p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Bax、Cleaved-caspase-3、Cleave-caspase-9蛋白和GRP78 mRNA表达明显增加,Bcl-2表达明显减少(P<0.01)。与模型组比较,补肾活血方低剂量组、补肾活血方高剂量组和缬沙坦组FBG无明显变化(P>0.05),BUN、Scr、UAER水平明显降低(P<0.05,P<0.01);肾小管区域GRP78阳性表达减少;肾小管上皮细胞凋亡形态学变化减轻;肾组织p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Bax、Cleaved-caspase-3蛋白和GRP78 mRNA表达明显减少,Bcl-2表达明显增加(P<0.05,P<0.01);补肾活血方高剂量组和缬沙坦组Cleave-caspase-9蛋白表达减少(P<0.01)。与补肾活血方低剂量组比较,补肾活血方高剂量组GRP78 mRNA表达明显减少(P<0.01)。结论补肾活血方可改善db/db小鼠的肾功能,其机制可能与抑制PERK-ATF4-CHOP信号通路、减轻内质网应激、减少细胞凋亡有关。