课程文献中心 更多>>

关键词： 慢病毒载体   Gag-Caspase-8   三阴性人乳腺癌原代细胞   Caspase-8   S期阻滞  

摘要： 目的探讨携Gag-Caspase-8慢病毒样颗粒对三阴性乳腺癌原代细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响及作用机制。方法收集临床人乳腺癌标本3例,通过改良组织块培养法培养人乳腺癌原代细胞,通过HE染色、免疫组化及免疫荧光鉴定所培养的细胞是否为高纯度三阴性人乳腺癌原代细胞;慢病毒转染构建携Gag-Caspase-8慢病毒样颗粒,细胞分为PBS组、Gag-VLPs组和Gag-CASP8-VLPs组。采用MTT法评估细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移能力,AO/EB染色检测细胞凋亡,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,蛋白质免疫印迹考察凋亡相关蛋白表达。结果临床肿瘤标本经HE染色确定为乳腺癌病理组织,免疫组化鉴定乳腺癌原代细胞特异性分子标记物CA153阳性高表达,并通过计算阳性细胞比例评估细胞纯度约为98%,免疫荧光检测结果显示,HER2、ER、PR均阴性表达,证明所培养的细胞为高纯度三阴性人乳腺癌原代细胞;Western blotting检测发现构建的Gag-VLPs和Gag-CASP8-VLPs内有慢病毒载体特异性分子标志物P24表达,证明慢病毒样颗粒包装成功。Gag-CASP8-VLPs干预三阴性人乳腺癌原代细胞24、48 h后,与对照组PBS和Gag-VLPs相比,倒置显微镜下观察到细胞皱缩、体积减小、贴壁能力下降且漂浮细胞增多;MTT检测显示,Gag-CASP8-VLPs组显著抑制了人乳腺癌原代细胞的生长(P<0.01),并呈时间依赖性;细胞划痕实验观察到,Gag-CASP8-VLPs组可显著抑制人乳腺癌原代细胞的迁移能力(P<0.05);流式细胞术检测发现,Gag-CASP8-VLPs组S期细胞数量显著增高(P<0.01),细胞阻滞于S期;AO/EB染色及流式细胞术检测发现,Gag-CASP8-VLPs组可诱导细胞发生凋亡(P<0.01);Western blotting结果显示,Gag-CASP8-VLPs组三阴性乳腺癌原代细胞内Gag-Caspase-8、Pro caspase-8、Activecaspase-8和Caspase-3凋亡相关蛋白表达显著增高(P<0.01)。结论慢病毒介导Gag-Caspase-8将活化的Caspase-8导入三阴性乳腺癌原代细胞,通过激活下游Caspase-3,诱导细胞凋亡,并使细胞停滞在S期,从而抑制细胞增殖和迁移。

关键词： 牛轮状病毒(Bovine rotavirus   BRV)   腹泻   流行病学   检测方法  

摘要： 牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)是引起犊牛腹泻的主要病原。感染牛可引起的疾病具有发病率高、流行性广、危害性大等特点,对养牛业造成巨大经济损失。主要介绍了BRV基因组和重要编码蛋白以及BRV的流行情况,从病原分离及鉴定、电镜观察、免疫学检测方法、分子生物学诊断方面概述了牛轮状病毒的检测技术,并提出了展望,为后期对BRV的诊断、检测及防控提供参考。

关键词： 抗逆转录病毒药物   抗HIV药   糖代谢障碍   脂代谢障碍   体重   人类免疫缺陷病毒  

摘要： 抗逆转录病毒治疗(ART)显著提高了人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的生存率和生活质量。随着患者生存期的延长,药物导致患者血糖升高、血脂异常和体重增加等新的健康问题日益突出。不同的抗逆转录病毒药物对血糖、血脂及脂肪组织的影响不同。本文综述了近年来核苷类逆转录酶抑制剂、非核苷类逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、整合酶抑制剂对HIV感染者血糖、血脂代谢及体重影响的研究进展,并提出相应管控建议。

关键词： 填埋场开采   气溶胶颗粒   微生物浓度   群落组成   形貌特征  

摘要： 为了解填埋场垃圾开采过程中微生物气溶胶的污染特征,采用Andersen 6级空气微生物采样器对贵州省铜仁市某垃圾填埋场开采过程中不同区域的微生物气溶胶进行采集,研究了垃圾开采过程中气溶胶可培养细菌和真菌浓度分布特征,解析了气溶胶颗粒物形貌特征与理化特性及其对微生物群落结构的影响.结果表明:(1)可培养微生物气溶胶浓度为机械作业区(开挖区和筛分区)>厂界下风向>厂界上风向.(2)气溶胶颗粒物中,Galbibacter marinus、Chryseolinea sp.、Arthrobotrys amerospora和Pseudallescheria angusta是最常见的优势菌种.(3)开采区域气溶胶颗粒物形貌特征和矿物类型呈多样性,以不规则团聚体、略规则大块状体和表面光滑圆球状3种形貌为主,主要矿物类型有硅铝酸盐/硅氧矿物、硅铝飞灰、铁氧化物颗粒等.(4)颗粒物上绝大多数水溶性离子与赋存的优势菌种呈负相关,F^(-)、Cl^(-)、Ca^(2+)、K^(+)等水溶性离子与Rhodothermaceae sp.、Actinomarinales sp.等微生物呈正相关.(5)颗粒物中的Zn、Pb、Cr、As、Ni等重金属会抑制绝大多数细菌和真菌的生长繁殖.

关键词： CVC1302   DC   STAT3   Tfh细胞  

摘要： 为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T-bet、GATA3和RORγt的转录水平,STAT3信号通路活化水平,Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例及STAT3信号通路抑制后反向验证Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例。结果表明:1)免疫增强剂CVC1302极显著促进小鼠骨髓DC分泌IL-6和IL-21。2)细胞共培养试验显示,CVC1302可显著促进STAT3磷酸化水平,表明STAT3信号通路被激活。3)利用STAT3信号通路抑制剂后,CD4^(+)T细胞分化为Tfh细胞的水平显著降低,表明CVC1302依赖STAT3信号通路激活介导初始CD4+T细胞分化为Tfh细胞。综上,本研究推断CVC1302通过促进DC分泌IL-6和IL-12,并激活STAT3信号通路介导Tfh细胞的分化,旨在为后续免疫增强剂的开发提供思路。

关键词： 麻黄碱   脑缺血再灌注模型   神经元凋亡   Keap1/Nrf2信号通路  

摘要： 该研究旨在探讨麻黄碱(EPH)调节Keap1/Nrf2信号通路对脑缺血再灌注(I/R)模型小鼠神经细胞凋亡的影响。通过大脑中动脉闭塞(MCAO)建立脑I/R小鼠模型,将其分为model组、L-EPH组、H-EPH组、H-EPH+ML385组,每组12只,另取12只健康大鼠作为假手术组。给药结束后评估各组大鼠神经功能;TCC测量脑梗死面积;HE染色评估海马体病理损伤;Nissl染色观察海马体神经元损伤情况;TUNEL染色检测脑组织神经元凋亡情况;试剂盒测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;qRT-PCR检测脑组织中Keap1、Nrf2 mRNA表达情况;Western blot检测脑组织Keap1、Nrf2和凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2表达情况;免疫荧光染色定位Nrf2蛋白。研究结果发现,与假手术组比较,model组I/R小鼠神经元损伤,神经功能缺损评分升高、脑梗死面积增加、Nrf2mRNA及蛋白表达水平均降低,Nissl体数量减少,神经元凋亡率升高、Keap1 mRNA及蛋白表达水平均升高,Caspase-3蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05);L-EPH和H-EPH组I/R小鼠神经元损伤减轻,神经功能缺损评分下降、脑梗死面积减少、Nrf2 mRNA及蛋白表达水平均降低,Nissl体数量增加,神经元凋亡率下降、Keap1 mRNA及蛋白表达水平均升高,Caspase-3蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05),H-EPH组优于L-EPH组(P<0.05);而Nrf2抑制剂ML385的加入抑制了Nrf2表达,逆转了EPH对I/R小鼠的治疗作用(P<0.05)。总结可得,EPH能够抑制脑I/R小鼠神经细胞凋亡,可能与调节Keap1/Nrf2通路有关。

关键词： 新型冠状病毒   新生儿   临床特征   神经发育   预后  

摘要： 目的探讨新型冠状病毒(简称新冠病毒)感染新生儿不同临床分型的临床特征及18月龄神经发育结局。方法选择2022年12月20日至2023年1月30日郑州大学附属儿童医院收治的新冠病毒感染新生儿进行回顾性研究。根据临床表现分为轻症组(轻型和中型)及重症组(重型和危重型),比较两组临床特征,并在18月龄应用年龄与发育进程问卷(ages stages questionnaires,ASQ-3)随访神经发育结局。结果共纳入97例新冠病毒感染新生儿,男53例(54.6%),早产儿4例(4.1%)。其中轻症组66例(68.0%),重症组31例(32.0%)。重症组中发热(100%比81.8%)、热程>72 h(32.3%比9.1%)、气促(54.8%比31.8%)、纳差(71.0%比48.5%)、发绀(93.5%比0.0%)、休克(22.6%比0.0%)的比例高于轻症组(P<0.05)。重症组C反应蛋白升高(12.9%比0.0%)、降钙素原升高(16.1%比1.5%)、心肌酶升高(35.5%比13.6%)及血小板减少(9.7%比0.0%)的比例高于轻症组(P<0.05)。97例患儿中91例(93.8%)18月龄ASQ-3结果高于界值,6例(6.2%)接近界值,两组ASQ-3总分和各能区得分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论新生儿新冠病毒感染以轻、中型多见,重症感染易出现热程>72 h、C反应蛋白、降钙素原及心肌酶增高、血小板减少等表现。新冠病毒感染患儿在18月龄时未发现神经发育落后。

关键词： 高效液相体积排阻色谱(HPSEC)   猪伪狂犬病毒(PRV)   gD蛋白   疫苗   定量  

摘要： 本试验旨在建立高效液相体积排阻色谱(HPSEC)法进行重组猪伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gD的定量质控并评价其应用,进一步扩展该方法在兽用疫苗领域的应用范围。制备并鉴定gD蛋白标准品,检测其在保存过程中的稳定性;采用HPSEC法定量检测gD蛋白并鉴定其色谱峰;建立HPSEC法检测gD蛋白标准品的标准曲线,并进行线性、检测限、准确度和精密度验证;考察HPSEC法定量检测细胞培养料液样品、纯化样品和乳化样品中gD蛋白浓度的适用性;对比HPSEC法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法定量gD蛋白结果的相关性。结果显示,制备的gD蛋白标准品纯度>98%,可稳定存放12个月,浓度偏差为0.01%~2.80%。HPSEC法具有良好的线性(R^(2)=0.9999,n=8);检测限在5.0μg/mL以下;准确度较高,5个浓度的gD蛋白标准品检测准确度为93.2%~104.6%(n=6);精密度良好,5个浓度的gD蛋白标准品6次重复检测的相对标准偏差(RSD)为0.2%~1.6%(n=6);日间精密度良好,3批次细胞培养料液样品3 d各6次重复检测的RSD为1.1%~2.0%(n=6);可应用于细胞培养过程中gD蛋白在细胞培养料液样品中表达量的监测,纯化样品和乳化样品中gD蛋白的检测。分别采用HPSEC法和SDS-PAGE法定量12批细胞培养料液样品中gD蛋白浓度,2种方法结果高度正相关(Rs^(2)=0.9298,n=12),配对t检验无显著性差异(Ps=0.1457)。结果表明,HPSEC法定量检测猪伪狂犬病毒gD蛋白适用性好、重复性好、准确度高,能应用于抗原生产不同阶段样品的质量控制,指导疫苗工艺开发。

关键词： 血常规   C反应蛋白   小儿细菌感染   小儿病毒感染  

摘要： 目的:探讨在区分小儿细菌与病毒感染中血常规+C反应蛋白检验的作用.方法:选择2022年3月至2023年3月收治的100例病毒感染患儿为对照组,100例细菌感染患儿为观察组,检验C反应蛋白和血常规检验,并进行统计分析.结果:观察组较对照组在C反应蛋白和白细胞计数方面明显增高(P<0.05);C反应蛋白联合血常规检验结果较单独检验阳性检出率高(P<0.05).结论:C反应蛋白和血常规联合检验能较好地区分小儿的病毒和细菌感染,对患儿的早期诊断具有一定的指导意义.

关键词： 牙釉质   含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1   泛素蛋白连接酶   成釉细胞   牙釉质发育缺陷   釉原蛋白  

摘要： 目的研究含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)在小鼠牙釉质形成中的作用。方法对出生后(P)7 d(P7)小鼠切牙和P3.5小鼠下颌第一磨牙牙胚的单细胞RNA测序数据进行可视化, 分析Wwp1在小鼠牙上皮中的整体表达情况。采用免疫组化染色观察WWP1在不同时期小鼠切牙和下颌第一磨牙牙胚上皮中的表达。构建Wwp1基因敲除(Wwp1 KO)小鼠。分别收集P1、P7 Wwp1 KO及同窝对照小鼠各3只, P14、P28、2和3个月的Wwp1 KO及同窝对照小鼠各6只。采用显微CT分析小鼠磨牙及切牙的牙釉质形成量。采用扫描电镜观察小鼠切牙和磨牙牙釉质断面结构。能谱分析检测切牙断面釉柱表面钙磷含量。采用免疫荧光检测小鼠釉原蛋白(AMELX)表达。培养类成釉上皮细胞LS-8, 转染Wwp1 siRNA或过表达质粒, 采用蛋白质印迹法检测AMELX的表达。结果单细胞测序数据显示, Wwp1在小鼠切牙和下颌第一磨牙牙胚上皮细胞中高表达。免疫组织化学染色显示, 小鼠切牙和磨牙牙胚中WWP1高表达于分泌前期、分泌期、过渡期和成熟期的成釉细胞。不同于对照小鼠, Wwp1 KO小鼠下颌切牙呈现不透明白垩色。Wwp1 KO小鼠磨牙和切牙牙釉质体积[分别为(0.155±0.016)、(0.300±0.017)μm3]较对照小鼠[分别为(0.203±0.062)、(0.418±0.023)μm3]显著降低23.95%(P<0.001)和28.31%(P<0.001)。扫描电镜观察显示, Wwp1 KO小鼠釉柱低平、松散、结构紊乱。能谱分析结果显示, Wwp1 KO小鼠切牙牙釉质断面钙元素的质量百分比[(20.74±0.91)%]和钙磷比(1.93±0.01)均显著低于对照小鼠[分别为(30.30±3.83)%和2.02±0.01](均P<0.001)。免疫荧光结果显示, P1和P7的Wwp1 KO小鼠下颌第一磨牙牙胚成釉细胞中AMELX表达均显著低于对照小鼠(均P<0.001)。在LS-8细胞中敲低或过表达WWP1分别使AMELX蛋白表达下降或上升。结论 WWP1对小鼠牙釉质有促进成釉细胞分化和釉基质矿化的作用, 从而可以促进牙釉质的正常发育。