关键词:
健脾益智法
细胞凋亡
线粒体
线粒体丝氨酸蛋白酶
缺血性脑卒中
摘要:
目的观察健脾益智法对缺血性脑卒中大鼠线粒体丝氨酸蛋白酶(high temperature requirement factor A2/Omi,HtrA2/Omi)通路的影响,探讨其脑神经保护机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、健脾益智组(灌胃,14.4 mL/kg)和UCF101组(腹腔注射,1.5μmol/kg),每组12只,建立大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,各治疗组给药1次,各组24小时后取材。测定Zea Longa神经功能缺损评分及神经功能改善评分有效率。采用RT-qPCR检测HtrA2/Omi、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-9、Caspase-3)、DNA修复酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)等基因表达水平;采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测HtrA2/Omi、XIAP、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、PARP等蛋白表达情况。结果(1)Zea Longa神经功能缺损评分结果:与正常组比较,MCAO模型各组大鼠神经功能评分显著升高(P<0.01)。(2)神经功能改善评分有效率:健脾益智组有效率100%,UCF101组有效率达58.3%(P<0.05)。(3)RT-qPCR结果:与正常组比较,模型组HtrA2/Omi、Caspase-3、PARP基因表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),XIAP基因表达无统计意义(P>0.05),Caspase-9趋势升高但无统计意义(P>0.05)。与模型组比较,健脾益智组、UCF101组HtrA2/Omi、Caspase-3、PARP基因表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Caspase-9趋势降低但无统计意义(P>0.05);健脾益智组XIAP基因表达水平显著升高(P<0.01),UCF101组XIAP基因表达水平虽有所上升,但无统计意义(P>0.05)。(4)WB结果:与正常组比较,模型组HtrA2/Omi、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、PARP蛋白表达水平显著升高(P<0.01),XIAP蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。与模型组比较,健脾益智组、UCF101组HtrA2/Omi、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、PARP蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),XIAP蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论健脾益智法可能改善MCAO大鼠受损神经功能,其机制与抑制线粒体凋亡HtrA2/Omi通路激活有关。