关键词:
山羊星状病毒
ORF2蛋白
原核表达
间接酶联免疫吸附试验
摘要:
为了建立山羊星状病毒(Caprine astrovirus)的血清抗体检测方法,从经RT-PCR检测星状病毒阳性的腹泻羊粪便中克隆山羊星状病毒ORF2基因并构建表达载体,用原核表达技术制备重组ORF2蛋白,重组蛋白纯化复性后作为包被抗原,建立山羊星状病毒血清抗体间接ELISA检测方法,并对临床收集的山羊血清样本进行检测。结果显示,ORF2重组蛋白大小为42 ku,Western blot证明其具有良好的反应原性;ELISA检测方法最佳工作条件为6μg/mL抗原包被酶标板,一抗血清稀释倍数为1∶100,酶标二抗稀释倍数为1∶5000,阴阳临界值为0.327。用该方法对山羊流产衣原体、立克次体、山羊支原体山羊肺炎亚种及伪结核棒状杆菌的阳性血清进行检测,结果均为阴性;当阳性血清稀释至1024倍时检测结果仍为山羊星状病毒抗体阳性;批内、批间变异系数均小于10%。用该方法对陕西省部分羊场收集到的288份血清样本进行检测,山羊星状病毒抗体阳性率为59.03%。建立了一种检测山羊星状病毒抗体的间接ELISA检测方法,为山羊星状病毒感染的诊断和流行病学调查提供了技术支持。