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关键词： 鄱阳湖   水文连通性   碟形湖   细菌群落   真菌群落  

摘要： 水文连通性通过扩散效应和局地理化环境调控对微生物群落结构改变产生重要影响，但仍缺乏水文连通性与湿地微生物群落结构之间的定量研究.本研究在鄱阳湖典型湿地10个碟形湖进行水体细菌、沉积物细菌和真菌样品采集分析，构建了碟形湖水文连通性指标体系，以期定量分析水文连通性对微生物群落结构的影响程度.结果表明: 水体细菌、沉积物细菌和真菌群落α多样性枯水初、中和后期存在显著差异，其中沉积物细菌和真菌群落枯水中期更高; 随着水文连通性的升高，水体细菌α多样性呈下降趋势，沉积物细菌和真菌在中水文连通性下α多样性较高.水体细菌群落β多样性在不同时期差异更明显，沉积物细菌和真菌群落β多样性在空间上差异更明显.湖水面积比(WSP)和水深(WD)是影响水体细菌群落结构的主要水文连通性变量.湖盆高程(LE)和WD是影响沉积物细菌和真菌的主要水文连通性变量.水文连通性对水体细菌群落结构解释率(7.6%)低于对沉积物细菌和真菌群落结构解释率(分别为33.3%和29.7%).其中水文连通性与理化因子对水体细菌群落结构交互解释率为2.4%，对沉积物细菌和真菌群落结构交互解释率分别为9.7%和6.2%.沉积物细菌和真菌分别以随机性和确定性过程主导，水体细菌受确定性和随机性共同主导.中等水文连通性碟形湖水体细菌群落随机性构建过程更强; 沉积物细菌和真菌群落构建随着水文连通性的增强，随机性构建过程减弱.研究结果有助于进一步认识水文连通性对湿地微生物群落结构的影响机制，并为湿地环境保护和修复提供一定的科学依据.

关键词： 帕金森病   绞股蓝   行为学实验   多巴胺能神经元   丝裂原活化蛋白激酶家族蛋白   线粒体凋亡相关蛋白   小鼠  

摘要： 目的:探究绞股蓝提取物（GP）对6-羟基多巴胺诱导的帕金森病模型小鼠的保护作用及潜在机制。方法:将C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、GP小剂量组和GP大剂量组，每组16只。通过在小鼠黑质网状部区定位注射6-羟基多巴胺的方式建立帕金森病小鼠模型。造模两周后，阳性对照组、GP小剂量组和GP大剂量组分别给予左旋多巴（10 mg/kg，腹腔注射）、GP(100 mg·kg-1·d-1，口服)和GP(200 mg·kg-1·d-1，口服)三周。通过旷场实验和CatWalk步态分析实验评估GP对帕金森病小鼠运动功能障碍的影响；通过抓力仪检测小鼠的肌肉力量；通过免疫荧光染色检测酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元数变化；通过酶联免疫吸附试验检测脑内多巴胺和血清素水平；通过蛋白质印迹法分析GP对磷酸化胞外信号调节激酶（ERK）1/2、磷酸化p38、磷酸化c-Jun氨基端激酶（JNK）等丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族蛋白和B细胞淋巴瘤蛋白（Bcl）-2、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、cleaved-胱天蛋白酶（caspase）-3等线粒体凋亡相关蛋白的影响。结果:行为学实验结果显示，与模型对照组比较，GP各治疗组移动距离、正常步序比、四肢步周长度增加，前肢抓力增大（均P<0.05）。进一步检测发现，与模型对照组比较，GP治疗组TH阳性细胞比例增加，脑组织中多巴胺和血清素含量增加，p-ERK1/2表达增加，磷酸化p38和磷酸化JNK1/2表达减少，Bax/Bcl-2和cleaved-caspase-3/caspase-3下降（均P<0.05）。结论:GP可通过调节磷酸化MAPK家族和线粒体凋亡相关蛋白的表达，提高中脑组织内多巴胺和血清素水平，促进黑质网状部区域多巴胺能神经元存活，改善帕金森病小鼠的运动障碍。

关键词： 灵芝多糖   肝母细胞瘤   凋亡   自噬   Akt/mTOR信号通路  

摘要： 通过探讨灵芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharide， GLP）对肝母细胞瘤HepG2、Huh6细胞模型及KM小鼠原位移植瘤模型的作用机制，以期为GLP的临床应用提供理论依据。采用CCK-8法检测细胞活力；BeyoClickTMEdU-488实验检测细胞增殖能力；Hochest 33258染色检测细胞凋亡情况；Mrfp-GFP-LC3双荧光染色检测细胞自噬情况；采用HepG2细胞建立原位移植瘤动物模型，分别用生理盐水及100、200、300 mg·kg-1GLP处理小鼠，分析取材后肿瘤数目和大小的变化；苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色观察肿瘤组织及主要脏器（心、肝、脾、肺、肾）组织病理情况；Western blot法检测细胞中肿瘤抑制蛋白53（tumor protein P53， P53）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bcl-2-associated X protein， Bax）、裂解半胱氨酸蛋白酶蛋白-3（cleaved-caspase-3）、苄氯素-1（Beclin-1）、自噬相关蛋白-5（autophagy related protein-5， Atg-5）、微管相关蛋白轻链-3Ⅰ（microtubule-associated protein-light chain-3Ⅰ， LC3Ⅰ）/LC3Ⅱ、自噬衔接蛋白62（autophagy adapter protein 62， P62）、蛋白激酶B（protein kinase B， Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin， mTOR）、磷酸化mTOR（p-mTOR）的蛋白表达。体外实验结果显示，与对照组相比，GLP处理后肿瘤细胞活力显著降低，细胞凋亡比例呈剂量依赖性增高，且自噬流被抑制。在体内实验中，与模型组相比，GLP处理后小鼠的肿瘤数目和大小显著下降；Western blot结果显示，与对照组或模型组相比，GLP处理后P53、Bax、cleaved-caspase-3、Beclin-1、Atg-5、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平显著升高，Bcl-2、P62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著降低。这些结果表明GLP能够通过调控Akt/mTOR途径诱导肝母细胞瘤细胞凋亡与自噬。

关键词： 牛病毒性腹泻病毒   混合感染   病毒   细菌   支原体  

摘要： 牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）在世界各地的牛群中普遍存在。临床上BVDV的急性感染不明显，但这种病毒被认为是引起呼吸道疾病的主要组成部分，其高发病率给全球畜牧业造成了重大经济损失。BVDV混合感染发病率和死亡率较高，感染BVDV牛易受到机会性病毒或细菌性病原的侵袭而形成混合感染，因此，所造成的损失也远远高于单一病原感染。本文综述了BVDV与其他常见病原混合感染的研究进展，通过阐述BVDV与细菌、病毒或支原体混合感染的协同作用或拮抗作用为混合感染疾病的预防和新型疫苗的研制提供参考。

关键词： 柴胡皂苷b1(Ssb1)   肝癌   凋亡   MCL1   STAT3   HSP90  

摘要： 目的该研究旨在探讨柴胡皂苷b1(Ssb1)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6凋亡的影响及其作用机制。方法通过MTT法检测Ssb1对Hepa1-6小鼠肝癌细胞存活率的影响;蛋白免疫印迹法(WB)检测Ssb1对信号转导和转录激活因子(STAT3)、热休克蛋白90(HSP90)、髓样细胞白血病-1(MCL1)、剪切体半胱氨酸蛋白酶-9(C-Caspase9)和剪切体半胱氨酸蛋白酶-3(C-Caspase3)等蛋白表达水平的影响;采用钙黄绿素/碘化丙啶(Calcein-AM/PI)活/死细胞染色和细胞免疫荧光检测Ssb1诱导Hepa1-6细胞凋亡的情况。建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察Ssb1给药组小鼠体重和体积大小的变化情况;采用WB检测Ssb1对肿瘤组织中相关蛋白表达水平的影响情况;采用组织免疫荧光检测Ssb1对肿瘤组织中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase3)表达的影响;采用苏木素-伊红(H&E)染色法观察Ssb1对肿瘤组织的影响。结果 与对照组相比,Ssb1组降低Hepa1-6细胞存活率,抑制Hepa1-6细胞中STAT3、HSP90和MCL1蛋白表达,上调C-Caspase9和C-Caspase3蛋白表达,死细胞数量增多,凋亡蛋白Caspase3荧光强度增加。与对照组相比,Ssb1组的小鼠体重变化不大,肿瘤体积变小,肿瘤组织中相关蛋白表达情况与细胞水平一致,肿瘤细胞核明显皱缩变小。结论 Ssb1通过抑制STAT3/HSP90下调抗凋亡蛋白MCL1表达,从而诱导肝癌细胞的凋亡。

关键词： 谷胱甘肽   镉   PK-15细胞   氧化损伤   细胞凋亡  

摘要： （目的）本研究探索了谷胱甘肽（Glutathione，GSH）对镉（Cadmium，Cd）所引起的PK-15细胞损伤的修复功能及其背后的作用机制。本研究主要针对猪肾PK-15细胞，利用MTT检测、光学显微镜观察、透射电镜观察、JC-1染色、彗星试验和流式细胞术等多种研究方法，检测GSH对Cd所造成的细胞氧化损伤及细胞凋亡的修复作用。研究结果显示，GSH显著缓解了Cd引起的PK-15细胞活性下降，维持ROS的稳态，从而缓解DNA和线粒体损伤及细胞凋亡等现象。Western blot结果表明，GSH可能通过上调抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达、下调促凋亡蛋白Bax的表达，进而对Cd诱导的PK-15细胞凋亡产生抑制作用。综上所述，GSH可以通过抑制氧化应激反应和减少细胞凋亡来缓解Cd诱导的PK-15细胞损伤。

关键词： A型塞内卡病毒   遗传进化分析   3A蛋白   多克隆抗体  

摘要： A型塞内卡病毒(senecavirus A，SVA)作为一种可以引起猪水泡样症状的外来病原，与口蹄疫病毒引起的临床症状难以区分。本研究成功分离1株SVA，将其命名为HN2019。经全基因组测序和进化分析发现，该分离株与我国毒株CH-HN-2017亲缘性最高。该毒株可在猪肾传代细胞(PK-15)、乳仓鼠肾细胞(BHK-21)中有效复制增殖，感染后均能产生细胞病变。通过病毒一步生长曲线、间接免疫荧光、Western-blot等试验研究了该毒株的生物学特性。同时，利用pCold-TF质粒构建该毒株非结构蛋白3A的原核表达载体，转化大肠杆菌系统，发现该重组蛋白可在上清中可溶性表达。将纯化后的重组蛋白分4次免疫BALB/c小鼠，成功制备针对3A蛋白的多克隆抗体。该抗体效价为1∶128 000，可特异性识别病毒感染的细胞产生特异性荧光，证明该抗体具有良好的反应性和特异性，为进一步研究SVA 3A蛋白的生物学功能及病毒的致病机制提供有效工具。

关键词： 非洲猪瘟病毒   D250R蛋白   原核表达   多克隆抗体   间接ELISA  

摘要： D250R是非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)感染早期表达的具有脱帽酶活性的非结构蛋白。本研究构建了pET-32a-D250R重组原核表达质粒，经IPTG诱导和镍亲和纯化成功获得原核细胞表达的重组蛋白His-D250R，该蛋白和真核细胞表达的重组蛋白Flag-D250R均能被ASFV标准阳性血清识别，证明D250R蛋白是ELISA抗体检测方法的潜在靶标。在此基础上，以纯化的重组蛋白为免疫原制备鼠源多克隆抗体，该抗体ELISA效价大于1∶409 600。Western-blot试验表明该抗体与Flag-D250R和His-D250R均具有良好的反应性，证明His-D250R蛋白具有良好的抗原性。进一步以His-D250R蛋白为包被抗原，通过对抗原包被、封闭、抗体孵育、底物反应等条件的优化，建立间接ELISA抗体检测方法。其阴阳性临界值为0.359，检测PRV、PRRSV、PCV2、CSFV等阳性血清结果均呈阴性反应，灵敏度达1∶3 200，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%，与商品化试剂盒符合率达98.8%。上述结果表明，基于His-D250R蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性、重复性良好，具备一定临床应用价值，可以为非洲猪瘟诊断方法开发提供重要支持。