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关键词： 海南地不容   氧化克班宁   肝癌细胞   细胞凋亡   细胞自噬  

摘要： 研究海南地不容抗肝癌活性成分氧化克班宁，抑制肝癌细胞增殖的具体机制。首先以噻唑蓝(MTT)法、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记、平板克隆法探究氧化克班宁是否造成HepG2和Hep3B2.1-7细胞增殖的抑制，经碘化丙啶(PI)单染观察氧化克班宁诱导HepG2和Hep3B2.1-7细胞凋亡，并以Western blot法验证凋亡效应蛋白半胱氨酸蛋白酶蛋白-3(c-caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2同源杀手蛋白(Bak)和髓样细胞白血病1(Mcl-1)是否参与凋亡过程。其次氧化克班宁与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)同时作用于HepG2细胞，检测细胞自噬标记物LC3和自噬相关蛋白真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)、磷酸化真核翻译起始因子4E结合蛋白1(p-4EBP1)、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)、磷酸化核糖体蛋白S6激酶(p-P70S6K)的变化。MTT法、BrdU标记、平板克隆法检测结果均显示，氧化克班宁可抑制HepG2和Hep3B2.1-7细胞增殖，且呈剂量依赖性。流式细胞术检测结果显示，氧化克班宁作用后，HepG2和Hep3B2.1-7细胞凋亡率显著升高。Western blot结果显示，氧化克班宁作用于HepG2细胞后，可上调c-caspase-3、Bax、Bak蛋白表达，下调PARP1、Bcl-2、Mcl-1蛋白表达，表明氧化克班宁可引发肝癌细胞凋亡，进而抑制肝癌细胞增殖；氧化克班宁抑制HepG2细胞增殖可能与诱导肝癌细胞发生保护性自噬有关；氧化克班宁还可促使细胞自噬标记物LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化，降低4EBP1、P70S6K蛋白的磷酸化水平，自噬抑制剂3-MA可逆转此过程，表明氧化克班宁可通过诱导细胞自噬达到抑制肝癌细胞增殖作用。综上所述，氧化克班宁可通过诱导肝癌细胞凋亡和细胞自噬，进而抑制其细胞增殖。

关键词： 番茄褐色皱纹果病毒   凤果花叶病毒   复合侵染   全基因组序列   系统发育分析  

摘要： 为明确田间番茄Solanum lycopersicum植株出现花叶、泡状突起和褐色坏死等症状是否由番茄褐色皱纹果病毒（tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV）和凤果花叶病毒（pepino mosaic virus,PepMV）复合侵染所致，在我国北方3个农业园区采集疑似被ToBRFV和PepMV侵染的26份番茄样品，采用反转录PCR技术对其进行检测，选择代表性样品的PCR产物进行拼接后获得ToBRFV和PepMV全基因组序列，对获得的全基因组序列进行相似性、变异性和系统发育分析。结果显示：在26份样品中，有20份样品仅被ToBRFV单独侵染，侵染率为76.92%，未见PepMV单独侵染，有3份样品被ToBRFV和PepMV复合侵染，侵染率为11.54%。ToBRFV-240417与ToBRFV荷兰分离物ToBRFV-6166394＿2(GenBank登录号为OM515237.1)的核苷酸序列相似性最高，达99.70%;ToBRFV-231025、ToBRFV-240304与ToBRFV中国分离物ToBRFV-XG(GenBank登录号为OR451555.1)的核苷酸序列相似性最高，分别为99.88%和99.90%;PepMV-231025与PepMV美国分离物Ch2(GenBank登录号为DQ000985.1)的核苷酸序列相似性最高，达97.43%;PepMV-240304与PepMV德国分离物DSMZ PV-0716(GenBank登录号为OR233202.1)的核苷酸序列相似性最高，达97.58%。该结果丰富了ToBRFV、PepMV全基因组序列信息，有助于进一步了解它们之间的遗传进化关系。

关键词： 大灭绝   生态结构   古群落   食物网   稳定性   生态系统   地层学  

摘要： 约2.52亿年前发生的二叠纪-三叠纪（P-Tr）之交生物大灭绝是地质历史上规模最大的生态危机事件，被认为是当代生态危机参照案例.不过，整合多个门类、系统刻画生物群落食物网结构整体演变过程的研究仍然匮乏.特别是，化石记录的不完备性及其在地层记录的低时间分辨率成为人们“以古鉴今”的卡点.本研究基于浙江煤山P-Tr界线金钉子剖面丰富的化石物种出现记录，利用PyRate贝叶斯模拟方法对所有物种在剖面上真实首现与末现时间进行了重新估算.结果显示，物种多样性的下降分为3个阶段，第1和第3阶段迅速下降，第2阶段缓慢下降.在此基础上，探讨以不同时间分辨率划分古群落的方案，从50 ka每个群落，不断提高时间分辨率，到1 ka每群落，分析各种划分方案下相邻群落物种组成的相似度.随着时间分辨率的提高，煤山剖面相邻群落的物种组成越来越像，对于1～4 ka每群落的方案，5%以上相邻群落在物种组成上完全一样.因此选取5 ka每群落的时间分辨率，构建了连续的古群落序列，量化评估了群落组成和模拟食物网稳定性/抗灾能力在P-Tr之交的演变过程.结果表明，生态结构以及群落稳定性在第1和第2阶段的变化不大，在第3阶段骤然变化.古群落在第1和第2阶段尚具备较强的抗灾能力，可能因为这两个阶段消失的主要为冗余物种，群落的生态结构和功能维持了完整，随着第3阶段多种功能群的消失，生态结构才完全崩溃重组.本文探讨了煤山古群落划分的不同时间分辨率方案，重建了5 ka分辨率下的古生态结构演变过程，为开展高分辨率深时生态系统演化及古今对比研究提供了新思路.

关键词： 大黄-枳实炭   纳米类成分   α-萘异硫氰酸酯   肝内胆汁淤积症   氧化应激   细胞凋亡   内质网应激  

摘要： 目的 研究大黄（Rhei Radix et Rhizoma,R）-枳实炭纳米类成分（Aurantii Fructus Immaturus Carbonisatum nanocomponents,AFIC-NCs）对肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis,IC）的治疗作用及作用机制。方法 从枳实炭中提取分离出AFIC-NCs并利用纳米材料表征方法分析其形态结构、光学性质和官能团性质等。将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、熊去氧胆酸（ursodeoxycholic acid,UDCA,100 mg/kg）组及R-AFIC-NCs高、中、低剂量（22.66、11.33、5.67 mg/kg）组，每组各8只。连续给药7 d，并于第5天ig α-萘异硫氰酸酯（α-naphthalene isothiocyanate,ANIT）诱导IC小鼠模型。给药结束后检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、直接胆红素（direct bilirubin,DBIL）、间接胆红素（indirect bilirubin,IBIL）、总胆红素（total bilirubin,TBIL）和总胆汁酸（total bile acid,TBA）的水平；观察小鼠肝脏和胆囊外观并计算肝脏指数；采用苏木素-伊红（hematoxylin eosin,HE）染色观察肝组织病理变化；TUNEL法检测肝细胞凋亡；检测各组小鼠肝脏中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）及还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）含量；采用Western blotting法检测肝组织中内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和C/EBP同源蛋白（protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,CHOP）的表达。结果 表征结果显示，AFIC-NCs呈类球形颗粒，晶格间距为0.18 nm，表面含有羟基、羰基等官能团。R-AFIC-NCs各剂量组均能显著下调肝内胆汁淤积症模型小鼠肝功能指标ALP、ALT、AST及胆汁淤积指标DBIL、IBIL、TBIL、TBA(P<0.05、0.01)；改善肝组织损伤，减少肝细胞凋亡（P<0.05）；降低炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的水平（P<0.05、0.01），提高肝脏SOD和GSH活性（P<0.05、0.01），降低了MDA水平（P<0.05、0.01）；此外，R-AFIC-NCs各剂量组还能降低GRP78和CHOP蛋白的表达（P<0.05、0.01）。结论 R-AFIC-NCs可能通过抑制内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP的表达，减轻肝内胆汁淤积症引起的细胞凋亡和氧化应激反应，从而改善其肝脏功能。

关键词： 新型冠状病毒肺炎   呼吸道感染   晚期新生儿   严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型   非典型病原体   流行病学   呼吸道合胞病毒   副流感病毒  

摘要： 目的 了解新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情下晚期新生儿常见呼吸道病毒及非典型病原体流行特点及非药物干预措施(NPIs)对新生儿呼吸道病原体的影响。方法 纳入2018年1月—2023年2月因呼吸道感染症状在苏州大学附属儿童医院治疗的2 452例晚期新生儿为研究对象，以2018年1月—2019年12月的数据作为疫情管控前组，2020年1月—2021年12月的数据作为疫情管控后组。回顾性分析COVID-19疫情下患儿住院期间8种常见病原体核酸检测结果变化；对2020年3月—2023年2月的数据进行比较，总结COVID-19疫情常态化后不同季节新生儿呼吸道病原体的流行病学特点。结果 2 452例住院患儿病原体阳性例数为364例(14.85%),其中呼吸道合胞病毒(RSV)检出率最高为262例(10.69%),其次为副流感病毒(PIVS)64例(2.61%)。COVID-19疫情管控前后8种病原体核酸的阳性总检出例数分别为229例(17.1%)、96例(12.3%),疫情管控后检出率低于管控前，差异有统计学意义(P<0.05);疫情管控后8种病原体检出率均较管控前降低，但仅RSV检出率的差异有统计学意义(P<0.05)。疫情管控后RSV阳性例数峰值月份较管控前延迟1个月，2022年的RSV发病出现2次高峰。PIVS在疫情管控前多发于春、夏、秋季，管控后冬季多发，并在管控后检测到的阳性峰值较管控前高；PIVS感染的季节性发生变化。结论 COVID-19疫情管控后，苏州晚期新生儿呼吸道感染常见病原体检出率和流行病学发生改变，采取戴口罩、手卫生消毒、保持社交距离、非必要不外出等NPIs对呼吸道病原体的爆发有一定的防范作用。

关键词： 肠道病毒   埃可病毒11型   基因分型   交叉中和   血清保护  

摘要： 埃可病毒11型（Echovirus 11,E11）是一种常被检出的肠道病毒，近年来在亚洲与欧洲地区多次报道由E11引发新生儿重症病例甚至导致死亡。自1994年E11在我国被首次检出后，其基因型历经多次更替。为探究基因型更替与型间交叉中和能力是否存在相关性，本研究选取了曾经在中国流行的A1、A2、C1、C3、D5以及E基因型的代表性毒株，依次进行噬斑试验、浓缩、纯化和灭活，随后与铝佐剂混合，于第0周、第2周、第4周，分三次对6周龄雌性BALB/c小鼠进行免疫。在末次免疫1周后，采集小鼠抗血清进行交叉中和效果评估。中和实验结果表明，不同基因型间的交叉中和能力存在显著差异。部分毒株能够突破前代毒株所形成的免疫保护屏障，这一现象与E11流行基因型转换的规律相契合。其中，D5基因型毒株展现出较高的免疫原性以及较为广谱的交叉保护特性，具备作为理想疫苗候选株的特征。同时，当前流行的D5基因型毒株抗血清对C1和C3基因型毒株提供的交叉保护作用有限，提示未来有可能出现新的基因型更替。此外，通过序列分析发现，VP1-BC loop和VP2-EF loop区域的差异可能对E11毒株的抗原性产生影响，进一步揭示了E11免疫逃逸的潜在机制。本研究系统地探讨了E11的交叉免疫效应及其对基因型更替的影响，为制订E11感染的防控策略和开展疫苗研发提供了重要的参考依据。

关键词： 无偿献血者   新型冠状病毒   抗体检测   恢复期血浆   人群分布  

摘要： 目的 了解新型冠状病毒（简称新冠病毒）感染“乙类乙管”初期，连云港市无偿献血人群中新冠病毒抗体的流行情况，并筛选出符合治疗要求的新冠康复者血浆。方法 收集2023年1月连云港市红十字中心血站无偿献血者的血液标本共1 456份，利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血液中新冠抗体水平，并筛选出含有高效价特异性抗体的血浆，进而分析抗体滴度在献血者中的分布情况。结果 在1 456名无偿献血者中，IgM抗体阳性率为1.99%(29/1 456)，而IgG抗体阳性率高达98.56%(1 435/1 456)。IgG抗体滴度为40的献血者占比最高，达到45.19%(658/1 456)，而IgG抗体滴度≥160的献血者占17.45%(254/1 456)。无症状献血者与距离最后一次阳性检测1、2、3、4周后献血的献血者在IgG抗体滴度差异有统计意义（Z=35.210,P<0.05）,2周后献血的组别中IgG抗体滴度≥160的占比最高，达到30.53%(40/131)。在新冠康复献血者中，血浆IgG抗体滴度水平在年龄、血型、教育程度等方面差异均无统计意义（Z=0.426、5.583、8.155,P均>0.05），但在性别、居住区域、职业方面差异均有统计意义（Z=2.641、7.447、21.279,P均<0.05），女性、市区居民、医务人员和公务员的血浆IgG抗体滴度较高。结论 连云港市无偿献血者中新冠病毒抗体流行率较高，且抗体水平在不同人群间存在差异。

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关键词： 乙型肝炎病毒   丙型肝炎病毒   人类免疫缺陷病毒   核酸血筛试剂   监督抽验   质量分析  

摘要： 目的 了解乙型肝炎病毒/丙型肝炎病毒/人类免疫缺陷病毒核酸检测试剂盒在生产环节的质量情况，为该试剂盒的批签发及质量监测提供参考。方法 按照2023年度国家药品抽验工作方案，从7家企业共抽取8批次试剂盒。根据各企业的药品注册标准，使用乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒核酸检测试剂国家参考品，对试剂最低检出限项目进行检验；同时，对2023年度2家进口乙型肝炎病毒/丙型肝炎病毒/人类免疫缺陷病毒核酸检测试剂批检数据进行分析；考察乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒核酸检测试剂的质量。结果 8批次试剂检测结果均符合各自药品注册标准，但部分企业药品注册标准低于2020年版《中国药典》及相应国家参考品要求，注册标准表述不规范等；2023年度进口试剂批检结果均为合格。结论 国产乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒核酸检测试剂质量水平总体较好，企业应加强与现行标准要求的一致性，完善自己的产品注册标准，保证产品质量。

关键词： 科学史教学   高中生物   光合作用   核心素养  

摘要： 新一轮的课程改革提出生物课程实施过程中的基本要求是发展学生的核心素养。生物科学史涵盖了科学的研究精神、方法、态度及思维，且已成为生物教育中宝贵的教学资源。但目前部分高中生物教师对于科学史知识的挖掘没有深入，学生探究学习程序化，对知识缺乏真正的理解和灵活运用的能力。基于此，本研究以高中生物学必修一《分子与细胞》中的科学史素材为主线，从核心素养角度分析其背后蕴含的素养功能，并设计教学案例“光合作用的原理和应用”，在科学史的基础上进行探究式教学，让学生亲历科学家的探究与思考过程，训练学生的科学思维，形成社会责任。