关键词:
胰腺导管腺癌
微小RNA
卷曲结构域家族1
细胞增殖
摘要:
目的验证微小RNA-324-5p(miR-324-5p)和靶向卷曲结构域家族1(TMCC1)在胰腺导管腺癌(PDAC)中的调控关系及对PDAC细胞增殖的影响。方法体外培养人胰腺导管上皮细胞系(HPNE)和PDAC细胞系Bxpc-3、Aspc-1、T3M4、Capan-1、Patu8988、PANC-1和Mia PaCa-2(均购自国家实验细胞资源共享平台)。实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测PDAC细胞中miR-324-5p和TMCC1的异常表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-324-5p调控TMCC1的表达情况;使用GEPIA数据库分析PDAC和正常胰腺组织中的TMCC1 mRNA的表达差异, 并通过生存分析探索TMCC1对PDAC患者预后的影响;慢病毒转染构建稳定敲低TMCC1的PDAC细胞株, 细胞计数实验(CCK-8实验)检测敲低TMCC1后PDAC细胞体外增殖能力的变化。组间比较采用t检验, 生存分析采用Log-rank检验。结果 RT-qPCR结果显示, 与HPNE细胞系(1.00±0.03)相比, miR-324-5p在PDAC细胞系BXPC-3(0.25±0.02, t=-8.6, P<0.01)、ASPC-1(0.23±0.04, t=-9.0, P<0.01)、T3M4(0.75±0.06, t=-2.5, P<0.05)、CaPan-1(0.44±0.04, t=-5.7, P<0.01)、Patu8988(0.45±0.02, t=-5.9, P<0.01)、PANC-1(0.17±0.03, t=-9.8, P<0.01)、Mia PaCa-2(0.73±0.09, t=-2.2, P<0.05)中的表达均显著降低;而TMCC1在PDAC细胞系BXPC-3(14.80±0.05, t=14.9, P<0.01)、ASPC-1(15.20±0.06, t=15.3, P<0.01)、T3M4(4.70±0.03, t=5.0, P<0.05)、CaPan-1(8.60±0.05, t=8.6, P<0.01)、Patu8988(12.90±0.09, t=13.3, P<0.01)、PANC-1(15.20±3.07, t=15.7, P<0.01)、Mia PaCa-2(4.90±0.14, t=5.7, P<0.05)中的表达水平均显著高于HPNE细胞系(0.96±0.04);双荧光素酶报告基因实验证实转染野生型TMCC1的细胞中相对荧光活性显著低于对照组(0.96±0.05比0.48±0.03, t=-2.4, P<0.05), 而转染突变型TMCC1的细胞相对荧光活性无明显变化(1.02±0.06比1.00±0.05, t=-0.1, P>0.05);GEPIA数据库中数据统计显示PDAC组织中TMCC1 mRNA表达水平较正常胰腺组织显著升高(3.79±0.12比2.01±0.09, t=3.0, P<0.05), TMCC1高表达的PDAC患者预后更差(中位生存时间19.6个月比38.4个月, P<0.05);CCK-8实验结果显示, 稳定敲低TMCC1后, PANC-1(1.21±0.09比0.72±0.04, t=2.1, P<0.05)和Patu8988(1.52±0.07比0.87±0.04, t=3.2, P<0.01)细胞的体外增殖能力均显著下调。结论 miR-324-5p在PDAC中呈低表达, 通过负向调控TMCC1促进胰腺癌细胞增殖能力。